ГОСТ Р 54653—2011
100
100
−
W
K
=
,
(2)
где W — влажность субстрата, %.
8.2.9 Наиболее вероятное количество микроорганизмов Mprob, содержащееся в 1 г исходного
субстрата, при уровне достоверности Р = 0,95 вычисляют по формуле
V
n
Mprob
=
X
±
2
s
X
×
K
1
,(3)
где X
=
å
X
— среднее число колоний, выросших из данного разведения;
X — общее число подсчитанных колоний при посеве данного разведения;
n — число повторностей;
n
s
X
= +
å
X
— среднеквадратическое отклонение;
2 — критерий (t) при Р = 0,95;
K
— разведение, из которого проведен посев;
V — объем суспензии, взятый для посева, см
3
.
Если уровень достоверности составляет 99 %, то (t) критерий равен 2,7.
8.2.10 Для учета микроорганизмов, которые плохо или совсем не развиваются на плотных пита-
тельных средах, используют посев в жидкие среды (метод предельных разведений). Этот метод при-
меняют также при определении численности бактерий разных физиологических групп (денитрифициру-
ющие, азотфиксирующие и др.).
В пробирки с жидкой средой вносят измеренный объем посевного материала (1 см
3
) из различных
разведений. Посев проводят из каждого разведения или четырех-пяти последних, высевая в три — пять
параллельных пробирок. Посев одной пробы можно выполнять одной стерильной пипеткой, начиная с
большего разведения. Время инкубации колеблется от 3 до 10 сут и зависит от скорости роста микроор-
ганизмов, численность которых определяют. При этом отмечают плюсом (+) пробирки с разведениями, в
которых развились представители данной группы, а минусом (–) — его отсутствие. В жидких средах о
развитии микробов разных групп судят по помутнению среды, образованию осадка, пленки, пузырьков
газа, изменению окраски и т. д.
8.2.11 В целях более точного подсчета используют таблицу Мак-Креди, составленную на осно-
вании обработки многочисленных результатов методом вариационной статистики (см. приложение Д).
Необходимо составить числовую характеристику из трех цифр. Первая цифра отвечает числу парал-
лельно засеянных пробирок (отмечается последнее разведение, в котором рост микроорганизмов на-
блюдается во всех параллельных пробирках). Следующие две цифры обозначают число пробирок, где
происходит развитие микроорганизмов в последующих двух разведениях.
8.2.12 По таблице Мак-Креди находят вероятное число клеток, соответствующее числовой ха-
рактеристике, и умножают на степень разведения, при которой отмечен рост во всех параллельных
пробирках. При пересчете на 1 г абсолютно сухого субстрата полученный результат умножают на коэф-
фициент, рассчитанный по формуле (2).
Пример
Числовая характеристика составляет 321; вероятное число клеток 15, которое умножаем на
10 000. Если влажность органического удобрения равна 72 %, то умножаем на коэффициент 3,57.
Число клеток в 1 г абсолютно сухого органического удобрения равно:
15 · 10000 · 3,57 = 535500.
Расчет
Разведение
Число параллельно засеянных пробирок
Число пробирок, в которых обнаружен рост
10
–3
10
–4
10
–5
10
–6
10
–7
33333
33210
14
Статистическая обработка результатов микробиологических анализов проводится в соответствии
с требованиями ГОСТ Р ИСО 10576-1.
8.2.13
Схема
микробиологического
анализа
органических
удобрений
приведена
в
приложении
Д.