ГОСТ Р 54653—2011
9 Методы микробиологического анализа органических удобрений
9.1 Метод выявления микроорганизмов-аммонификаторов, использующих органические
формы азота
33
3
3
9.1.1 Наиболее активно в процессах аммонификации участвуют представители бактерий родов
Pseudomonas, Bacillus, Clostridium и Proteus, представители грибов порядка Mucorales, родов Aspergillus,
Trichoderma и др.
9.1.2 Типичные аммонификаторы выявляют посевом из соответствующего разведения (четыре-
пять) на мясо-пептонном агаре (МПА) по 6.3 или мясо-пептонном бульоне (МПБ) по 6.4. Для выявления
аммонифицирующих бактерий также можно использовать пептонную воду по 6.5.
9.1.3 Численность аммонификаторов определяют методом предельных разведений. О развитии
аммонифицирующих бактерий судят по помутнению среды и появлению на поверхности пленки. Учет
проводят на третьи — пятые — седьмые сутки.
9.1.4 В целях более точной оценки аммонифицирующей активности бактерий анализируют вы-
деление аммиака (NH ). Аммиак выявляют в атмосфере и субстрате. Выделяющийся NН окрашивает
подвешенную в пробирке красную лакмусовую бумажку в синий цвет. Накопление NН в субстрате уста-
навливают при помощи реактива Несслера по ГОСТ 4517. На фарфоровую пластинку с лунками или
предметное стекло помещают каплю субстрата, затем вносят каплю реактива Несслера. При большом
количестве NН образуется коричневый или буроватый осадок, при небольшом — оранжевая или жел-
тая окраска.
9.1.5 Бактерии, способные к аммонификации мочевины, — уробактерии, выявляют по выделению
аммиака на средах, содержащих мочевину, среде Федорова по 6.6, среде Зенгена по 6.7. Численность
уробактерий определяют методом предельных разведений. Посевы проводят из соответствующих раз-
ведений и инкубируют в термостате при температуре 25 °С — 30 °С. Через три — пять суток устанавли-
вают выделение аммиака в соответствии с 9.1.4.
Среду Зенгена разливают в пробирки по 6 см
3
. Посев проводят из разведений 1:10
3
— 1:10
9
. Куль-
тивирование происходит в течение пяти — семи суток в термостате при температуре 25 °С — 30 °С. О
содержании уробактерий судят по помутнению среды и появлению на поверхности пленки.
9.2 Метод выявления микроорганизмов, использующих минеральные формы азота
9.2.1 Группа микроорганизмов, использующих минеральные формы азота, представлена в основ-
ном бактериями и актиномицетами.
9.2.2 Бактерии и актиномицеты выявляют на крахмало-аммиачном агаре (КАА) по 6.8. Посев про-
водят из четвертого-пятого разведений по 0,05 см
3
на поверхность среды. Инкубируют в термостате
при температуре 28 °С, на четвертые-пятые сутки подсчитывают только бактериальные колонии, а на
седьмые — десятые подсчитывают актиномицеты. Отмечают окраску колоний (желтый, розовый, чер-
ный), воздушного мицелия (серый, белый, желтовато-серый, розовый) и среды (выделение пигмента в
субстрат).
9.2.3 При идентификации актиномицетов описывают консистенцию колоний (плотные, кожистые,
рыхлые), поверхность (мучнистая, бархатистая) и запах (землистый, эфирный, фруктовый).
Актиномицеты выделяют также на крахмало-казеиновой среде по 6.9 на глицерино-аргининовом
агаре по 6.10.
На данных средах, как правило, вырастают колонии актиномицетов, принадлежащих к родам
Streptomyces, Streptoverticellum, Chainia. Представители этих родов являются аэробными, грамположи-
тельными микроорганизмами. Они образуют разветвленный мицелий, обычно 0,5—2,0 мкм в диаметре,
который подразделяется на первичный, или субстратный, и вторичный, или воздушный, споры непод-
вижны, образуются в виде цепочек на специальных спороносящих гифах воздушного мицелия.
9.3 Метод выявления микроскопических грибов
15
9.3.1 Микроскопические грибы чаще обнаруживают на сусле-агаре по 6.11 на кислой среде Чапека
по 6.12 или среде Мартина по 6.13 с добавлением бенгальского розового. Перед посевом в сусло-агар
добавляют 2 см
3
стерильной молочной кислоты или 0,5 г лимонной кислоты. Перед посевом в сре-
ду Чапека добавляют 4 см
3
/дм
3
стерильной молочной кислоты. Среду разливают в чашки, тщательно
перемешивая покачиванием. Добавление кислот и других ингибиторов производится асептически в сте-
рильные охлажденные до температуре 45 °С — 50 °С питательные среды.