ГОСТ Р 54653—2011
9.3.2 Количество микроскопических грибов чаще учитывают методом глубинного посева 1 см
3
суспензии из трех-четырех разведений в стерильные чашки Петри. Инкубируют при температуре 26
°С — 28 °С, количество грибов учитывают на четвертые-пятые сутки.
9.4 Метод выявления целлюлозоразрушающих микроорганизмов
9.4.1 Из бактерий, интенсивно разлагающих целлюлозу в органических удобрениях, наиболее ча-
сто встречаются представители родов Сytophaga, Cellvibrio, Cellfalcicula, Polyangium и Sorangium.
9.4.2 Аэробные целлюлозоразрушающие микроорганизмы хорошо выявляются на среде Гетчин-
сона по 6.14 и среде Виноградского по 6.15.
9.4.3 На застывшую среду в чашки Петри помещают стерильный обеззоленный фильтр, засевают
суспензию по 1 см
3
из третьего-четвертого разведения, растирают стерильным шпателем. Инкубируют в
термостате при температуре 28 °С. Учет проводят на десятые сутки. На бумаге вырастают отдельные
колонии плесневых грибов, актиномицетов и бактерий. Подсчитывают количество микроорганизмов,
содержащихся в 1 г органического удобрения.
9.4.4 Из грибов, наиболее интенсивно разлагающих целлюлозу в органических удобрениях, наи-
более часто встречаются представители родов Dematium, Stachybotris, Cladosporium, Chaetomium,
Fumago.
9.4.5 Количественный учет аэробных целлюлозоразрушающих бактерий проводят также методом
предельных разведений. Посев из разведений органического удобрения производят в пробирки с жид-
кой средой Гетчинсона по 6.14 с полосками фильтровальной бумаги. О развитии целлюлозоразлагаю-
щих бактерий судят по разрушению полосок фильтровальной бумаги и образованию колоний.
9.4.6 В условиях ограниченного доступа воздуха целлюлозу разлагают в основном представители
рода Clostridium, например Cl. omelianskii, представляющий длинные тонкие палочки с круглой спорой
на конце.
9.4.7 Анаэробные бактерии, разлагающие целлюлозу, выявляют на среде Омелянского по 6.16.
Жидкую питательную среду разливают высоким слоем в высокие пробирки вместимостью 20—25 см
3
,
фильтровальную бумагу в виде полосок опускают на дно пробирки.
9.4.8 Посев проводят из разведений в несколько параллельных пробирок, которые инкубируют в
термостате при температуре 30 °С. Учет проводят методом предельных разведений на пятые — седь-
мые сутки по помутнению среды.
16
+−
−−
()
9.5 Метод выявления нитрифицирующих бактерий
9.5.1 Первую фазу нитрификации
(
NH
4
+
1
1
/
2
O
2
=
NO
2
− +
2H
+
H
2
O
)
осуществляют в основном
бактерии рода Nitrozomonas, вторую фазу
NO
2
+
1
/
2
O
2
=
NO
3
— Nitrozobacter.
Первую и вторую фазы нитрификации можно наблюдать в жидких средах Виноградского по 6.17.
9.5.2 Среды инокулируют из соответствующих разведений органических удобрений. Численность
нитрифицирующих бактерий определяют методом предельных разведений. Инкубируют при темпера-
туре 25 °С — 30 °С в течение трех-четырех недель. О развитии судят по изменению состава среды.
Через неделю после посева при изучении первой фазы нитрификации устанавливают образование
азотистой кислоты (капельная реакция с реактивом Грисса или цинк-йод-крахмалом в кислой среде). В
присутствии азотистой кислоты с реактивом Грисса по ГОСТ 4517 образуется красное окрашивание, с
цинк-йод-крахмалом — темно-синее окрашивание.
9.5.3 Для выявления нитрификаторов используют также аммонийно-магниево-фосфорнокислую
соль по 6.32, которую растирают в стерильной ступке, растворяют в 2 см
3
дистиллированной воды и
переносят на поверхность водного агара чашки Петри. Засевают по 1 см
3
суспензии из третьего-четвер-
того разведения, тщательно перемешивают круговыми движениями до равномерного распределения
соли. Инкубируют в течение пяти-шести недель во влажной камере при комнатной температуре. Учет
проводят по зонам растворения соли и пересчитывают на 1 г органического удобрения.
9.5.4 Оба раствора аммонийно-магниево-фосфорнокислой соли смешивают и прибавляют
20 см
3
насыщенного хлористого аммония. Затем приливают по каплям концентрированный аммиак до
образования сильного устойчивого запаха. Оставляют на 10 мин, фильтруют через бумажный фильтр,
промывают дистиллированной водой до исчезновения запаха. Высушивают на воздухе и развешивают
в пакетики по 0,8 г.
9.5.5 Для учета гетеротрофных нитрификаторов суспензию из разведений органических удобре-
ний высевают в чашки Петри на специализированную среду по 6.18. Посев инкубируют при комнатной