ГОСТ Р 54653—2011
13
разведения, 1 см
3
суспензии в колбе соответствует разведению 10
–1
, в первой пробирке — 10
–2
и т. д.
Пробирки и колбы обычно подписывают заранее двумя цифрами, написанными одна под другой. Верх-
няя цифра обозначает номер образца, нижняя — степень разведения (см. приложение Г).
8.2.4 При планировании посева на большое количество питательных сред 9 см
3
суспензии будет
недостаточно. В этом случае ряд разведений готовят в колбах или бутылках вместимостью 250 см
3
с 90
см
3
стерильной водопроводной воды. Из первой и последующих колб берут по 10 см
3
суспензии. Для
приготовления каждого разведения используют новую пипетку. Бутылки встряхивают 1 мин. Исполь-
зованные пипетки помещают в фарфоровую кружку, на дно которой кладут вату и наливают немного
воды. Все операции проводят при зажженной газовой горелке или спиртовке.
8.2.5 Высевают суспензию поверхностным или глубинным способом на плотные и жидкие пита-
тельные среды. Посев проводят в боксах, ламинарных шкафах, оборудованных ультрафиолетовыми
лампами, с соблюдением условий асептики. Набор сред зависит от задач бактериологического анализа
органических удобрений. Расплавленную и охлажденную до температуры 45 °С — 50 °С агаризованную
среду разливают в чашки Петри по 15—20 см
3
в каждую.
Чашки должны находиться на горизонтальной поверхности, чтобы получился ровный слой за-
стывшей среды. Чашки помещают в предварительно протертый 70%-ным этиловым спиртом и нагре-
тый до температуры 65 °С — 70 °С сушильный шкаф на 15—20 мин. В сушильном шкафу чашки Петри
переворачивают вверх дном, открывают и ставят под углом 45° на крышку и подсушивают для удаления
конденсационной воды до появления муарового рисунка на поверхности среды. Развившиеся колонии
микроорганизмов на таких чашках не расплываются и не сольются друг с другом.
Тщательно перемешав суспензию в пробирке или бутылке, стерильной пипеткой на поверхность
среды наносят точно измеренный объем (0,05 или 0,1 см
3
) соответствующего разведения, затем бы-
стро и тщательно растирают его стерильным стеклянным шпателем по всей поверхности среды. По-
сев обычно осуществляют из двух или трех последовательных разведений в целях проведения более
точного подсчета количества микроорганизмов в органическом удобрении. Из каждого разведения за-
севают по три — пять параллельных чашек. Для каждого разведения используют новый стерильный
шпатель. После посева чашки переворачивают крышками вниз и инкубируют в термостате при опреде-
ленной температуре необходимое время.
8.2.6 При глубинном посеве 0,5 или 1 см
3
суспензии из соответствующего разведения переносят
пипеткой в три — пять стерильных чашек Петри, затем заливают расплавленной и охлажденной до
температуры 45 °С — 50 °С средой и смешивают с посевным материалом легким вращательным дви-
жением. После застывания чашки помещают в термостат.
8.2.7 После прохождения необходимого срока инкубации чашки вынимают из термостата и под-
считывают число выросших колоний. Для правильного определения численности клеток подсчитывают
только такие чашки, в которых выросло колоний свыше десяти и не более 250—300. Закрытые чашки
просматривают в проходящем свете и отмечают колонии тушью или маркером по стеклу. Для удобства
дно чашки с помощью линейки и маркера делят на секторы. Подсчет колоний на непрозрачных средах
(почвенный агар) проводят непосредственно с поверхности. Для подсчета колоний используют спе-
циальные полуавтоматические счетчики. Чтобы не пропустить мелкие колонии, чашки дополнительно
просматривают под лупой.
8.2.8 Все количественные подсчеты на агаризованных средах необходимо проводить всегда через
одно и то же время после посева, чтобы получить сравнимые результаты.
Количество клеток М в 1 см
3
анализируемого субстрата вычисляют по формуле
V
M
=
a
×
10n
,(1)
где a — среднее число колоний при посеве данного разведения;
10 — коэффициент разведения;
n — порядковый номер разведения, из которого сделан посев;
V — объем суспензии, взятой для посева по 8.3.5, 8.3.6, см
3
.
Полученное количество клеток соответствует содержанию микроорганизмов в 1 г сырого суб-
страта.
Для пересчета на 1 г абсолютно сухого субстрата необходимо полученные результаты умножить
на коэффициент пересчета, который вычисляют по формуле