ГОСТ 30087-93
Эго условие необходимо выполнять при сканировании всех проб для компенсации влияния
фона, который создают присутствующие в экстракте пробы лю.минесцнрующие примеси, содержа
щиеся в одинаковых количествах во всех трех пробирках.
Запись спектра повторяют 2—3 раза, добиваясь хорошей сходимости.
Затем последовательно замораживают в жидком азоте вторую и первую пробирки и записывают
спектры флуоресценции в области длин волн 401—404 нм. обязательно выставляя перо самописца
при длине волны 401 нм в то же положение, что и при сканировании пробы в третьей пробирке,
добиваясь этого регулировкой размера щели и коэффициента усиления спектрофотометра.
Концентрацию 3.4-бензпирена ванализируемом экстракте определяют по графику, на котором
по оси абсцисс откладывают значение добавки 3,4-бензпирена в микрограммах, а по оси ординат
—высоту пика максимума характеристической линии 3.4-бензпнрена при 403 нм, измеренную
по полученным спектрограммам в миллиметрах.
Если концентрация исследуемого раствора попадает в область, пригодную для измерений, то
полученные экспериментальные точки лежат на одной прямой. Экстраполяция этой прямой до
пересечения с осью абсцисс дает на ней отрезок, соответствующий содержанию 3.4-бензпирена в
растворе с нулевой добавкой, т.е. в 1см5 исследуемого экстракта.
2.3.1.2К о л и ч е с т в е н н о е о п р е д е л е н и е с о д е р ж а н и я 3,4-бензпирена ме
тодом в н у т р е н н е г о с т а н д а р т а
В качестве внутреннего стандарта используют 1,12-бензперилен. В пробирку наливают 3 см3
экстракта 3,4-бензпирена в «-октане, приготовленного, как указано в п. 2.3 или 2.3.1 и помещают
в сосуд Дьюара с жидким азотом перед входной щелью спектрофотометра, юстируют пробирку на
линии 403 нм при длине волны возбуждающего света 367 нм. а затем производят запись
спектра исходного экстракта в области длин волн 401—409 нм. По интенсивности линии (по
высоте пика максимума характеристической линии 3,4-бензпирена при 403 нм), ширине щели и
коэффициенту усиления прибора оценивают приблизительное содержание 3,4-бензпирена в пробе.
Всоответствии с этой оценкой в пробирку с 3 см5экстракта добавляют 1,12-бензперилена в таком
количестве, чтобы в спектре пробы интенсивность линии 1.12-бензпернлена при 406,3 нм была
в 3—5 раз больше интенсивности линии 3,4-бензпирена при 403 нм.
Проводят запись спектра в области длин волн 401-409 нм дважды.
Интенсивности характеристических линий 3.4-бензпирена при 403 нм и 1,12-бензперилена при
406,3 нм (Н, и Н, соответственно) определяют по спектрограмме, измеряя в миллиметрах высоты
пиков максимумов характеристических линий этих соединений. В расчет принимают среднее зна
чение. Дачее рассчитывают коэффициент отношения (/0 интенсивности линии 3,4-бензпирена (Н,)
к интенсивности линии 1,12-бензперилена (Н,), X^Hi/H,.
Далее определяют этот коэффициент для стандартных растворов 3,4-бензпирена (Afct). Для
этого вдве пробирки наливают по 3 см3стандартных раствороп 3,4-бензпирена концентрацией 0,02
и 0,04 мкг/см3. В каждую из пробирок наливают такое же количество 1,12-бензперилена, что и в
пробирку с пробой. Проводят запись спектров дважды для каждого раствора 3.4-бензпирена в
области длин волн 401—409 нм.
При этом обязательно следят за тем, чтобы положение пера самописца на длине волны 401 нм
во всех случаях фиксировалось на одном уровне.
Далее по спектрограммам определяют интенсивное™ характеристических линий 3,4-бензпи
рена при 403 нм и 1.12-бензперилена при 406,3 нм (Н, и Н, соответственно). В расчет принимают
среднее значение. Рассчитывают /Сс,=Н,/Нг для каждой концентрации 3,4-бензпирена.
Концентрацию 3,4-бензпирена (с) в анализируемом растворе в микрограммах на кубический
сантиметр вычисляют по формуле
где с„ —концентрация 3,4-бензпнрепа в стандартном растворе, мкг/см3;
К —коэффициент, найденный по спектрограмме анализируемого раствора;
КС1—коэффициент, найденный по спектрограмме стандарлсого раствора, значение которого
ближе по значению к коэффициенту анализируемого раствора.
Проводят два параллельных определения и одновременно контрольный опыт, который прово
дят через все стадии аначиза с использованием всех реактивов согласно прописи методик, но без
навески продукта.
995