ГОСТ 30087-93
2.3 П р о в е д е н и еи с п ы т а н и я
В две круглодонные колбы вместимостью 500 см3 помешают по 25 г продукта, добавляют в
каждую 20 см3дистиллированной воды. 200 см’ этилового спирта и 20 г гидроокиси калия. Содер
жимое колб перемешивают встряхиванием. Колбы соединяют с обратным холодильником и нагре
вают на водяной бане при кипении реакционной смеси в течение 3 ч. Затем в колбы через
холодильник добавляют по 150 см3 дистиллированной воды, колбы с бани снимают и охлаждают до
комнатной температуры.
Посте охлаждения жидкую фазу реакционной смеси декантацией переносят в делительную
воронку, оставляя остаток продукта в колбе. В колбу с остатком добаатяют 150 см! гексана,
содержимое колбы энергично перемешивают и гексан декантируют в делительную воронку.
Воронку закрывают пробкой и энергично встряхивают, затем закрепляют в штативе и остав
ляют для расслаивания жидкостей. Для разделения образовавшейся устойчивой эмульсин к смеси в
делительной воронке добаатяют 20 см3 этилового спирта. Посте расслаивания нижнюю водно
спиртовую фазу сливают обратно в колбу с осадком, в гексановый экстракт переливают в колбу
вместимостью 500 см3.
Такуюобработку реакционной смеси повторяют еще два раза, используя для экстракции гексан
по 100 см3и этиловый спирт для расслаивания эмульсии, порциями по 20 см3.
По окончании экстракции остаток в колбе и гидролизат отбрасывают, а экстракт из двух
параллельных проб объединяют, промывают в делительной воронке дистиллированной водой три
раза по 50 см3 и упаривают порциями в предварительно взвешенной с точностью до второго знака
после запятой круглодонной колбе вместимостью 250 см3на ротационном испарителе при остаточ
ном давлении не ниже 50 мм рт. ст. и температуре водяной бани не более 60 "С. Колбу с экстрактом
оставляют в вытяжном шкафудля удаления следов растворителя, после чего взвешиваютс точностью
до второго знака после запятой.
От взвешенного экстракта отбирают ’/з часть в бюксу, не взвешивая. Колбу с остатком
экстракта взвешивают с указанной выше точностью. В бюксу с частью экстракта добаатяют 0.1—
0.2 см3 раствора-свидетеля 3,4-бензпирена, приготовленного, как указано в п. 2.2.3. Содержимое
бюксы растворяют в пегролейном эфире. Полученный раствор служит «свидетелем» при проведении
тонкослойной хроматографии. Остаток в колбе также растворяют в небольшом объеме петролейного
эфира. Полученный раствор является рабочей (анализируемой) пробой.
Для хроматографического разделения экстракта па стеклянную пластину размером 20x40 см
равномерно насыпают окись алюминия. Затем с помощью стеклянной палочки, разделенной на три
части (14. 1 и 3 см) резиновыми колечками толщиной 1мм и шириной 3 мм. тщательно разравни
вают окись алюминия.
Полученные растворы количественно наносят на подготоаленпую пластину стеклянными
капиллярами на узкую частъ —раствор из бюксы (свидетель), на широкую часть —раствор из колбы
(рабочая проба). Растворы наносят равномерно сплошной полосой, отступив от нижнего края
пластины 7—8 см.
После нанесения пробы и «свидетеля* пластину помешают вванну под углом 10—15“. наливают
петролейный эфир гак, чтобы он не доходил до линии нанесения пробы. Ванну накрывают стеклом и
проводят хроматографию, доводя фронт растворителя почти до верхнего края пластины.
Не высушивая пластину, облучают ее ультрафиолетовым светом и по светящейся полосе
«свидетеля* определяют место нахождения 3,4-бензпирена в исследуемой пробе. Отмечают границы
полосы 3,4-бензпнрена на хроматограмме исследуемой пробы. Пластину высушивают в вытяжном
шкафу.
При анализе некоторых образцов не происходит полного и четкого разделения флуоресциру
ющих компонентов при первичном хроматографировании в петролейном эфире. В этом случае по
«свидетелю» выделяют довольно широкую полосу окиси алюминия с перекрывающимися флуорес
цирующими компонентами. Полное разделение достигается при повторном хроматографировании,
как указано в п. 2.3.1.
Отмеченную на хроматограмме исследуемой пробы полосу с помощью предметного стекла
количественно переносят в экстрактор (см. рисунок. 1). Экстрактор с пробой подвешивают на
крючок специальной насадки, помещают в круглодопную колбу вместимостью 250 см3 с 10 см3
этилового спирта. Закрепляют колбу на штативе нал плиткой, соединяют с обратным холодильником
и приступают к элюированию пробы. Нагрев колбы регулируют так. чтобы слой растворителя над
окисью алюминия был 3—5 мм. Экстракцию проводят в течение 45 мин, начиная с момента слива
973