ГОСТ 30087-93
промывают водой трижды по 30 см3. Гексан упаривают на ротационном испарителе до объема
1,5—2.0 см3, а остаток гексана удаляют током воздуха через вакуумный алонж, соединенный с
водоструйным насосом, экстракт растворяют в 0,5 см3этилового спирта.
В стакан вместимостью 100 см3 отвешивают (10±0,2) г сефадекса а Н-20. добавляют 50 см3
этилового спирта и оставляют для набухания на 3—4 ч. Затем гель переносят, смывая небольшим
количеством спирта, в стеклянную хроматографическую колонку, дают растворителю стечь. На
подготовленную колонку наносят полученный экстракт трижды смывая его из колбы этиловым
спиртом порциями по 0.5 см3. Элюирование с колонки полициклических ароматических углеводо
родов, в том числе 3,4-бензпирена, проводят 160 см3этилового спирта, первую фракцию объемом
60 см3отбрасывают, собирают вторую фракцию объемом 100 см3. Скорость элюирования раствори
теля 0,5—1,0 с.м3/мин обеспечивают, создавая небольшое избыточное давление током воздуха или
азота через насадку, соединенную с воздуходувкой или газовым баллоном. Газ следует подавать через
стеклянную трубку, заполненную силикагелем или молекулярными ситами.
Раствор второй фракции переносят в грушевидную колбу вместимостью 50 см3, растворитель
упаривают до объема 0.5—1,0 см3, его остаток удаляют в токе воздуха или азота. Полученную
фракцию полициклических ароматических углеводородов далее анализируют с помощью высоко
эффективной жидкостной хроматографии или подвергают дополнительной очистке в тонком слое
ацетилированной целлюлозы для анализа спектрофлуориметрическим методом.
3.3.2Количественное определение 3,4-бензпирена методом высокоэффективной жидкостной хро
матографии
Количественное определение 3,4-бензпирена при использовании высокоэффективной жид
костной хроматографии проводят методом внутреннего стандарта или методом добавок.
3.3.2.1 О п р е д е л е н и ем е т о д о мв н у т р е н н е г ос т а н д а р т а
При использовании такого способа количественной оценки одновременно с пробой продукта
анализируют пробу контрольного опыта, добавляя в пробу продукта и пробу контрольного опыта
по 50 мкдм3 раствора бенз(в)хрнзена концентрации 0,5 мкг/см3 на стадии подготовки проб к ще
лочному гидролизу. Обе пробы проводят через все стадии испытания, указанные в п. 3.3.1. Сухой
остаток растворяют в 200 мкдм3ацетонитрила.
В условиях, указанных в п. 3.2.4, записывают хроматограммы раствора 3.4-бензпирена кон
центрации 250 мкг/см3, раствора бенз(в)хризена концентрации 100 мкг/см3, пробы контрольного
опыта с добавкой бенз(в)хрнзена и пробы продукта с такой же добавкой бенз(в)хризена. Измеряют
плошади пиков 3,4-бензпирена и бенз(в)хризена на хроматограммах пробы продукта и пробы
контрольного опыта.
Для каждой пробы записывают по две хроматограммы, отмечают пики, совпадающие по
времени с 3,4-бензпиреном и бенз(в)хрнзеном, определяют их площади. За окончательный результат
испытания принимают среднее арифметическое значение площади пика, рассчитанное из двух
хроматограмм.
3.3.2.2 О п р е д е л е н и е м е т о д о мд о б а в о к
Для количественной оценки при использовании метода добавок одновременно с пробой
продукта анализируют пробу контрольного опыта (все предусмотренные по методике реактивы
проводят через все стадии определения по п. 3.3.1). Полученные фракции полициклических арома
тических углеводородов, выделенные из проб продукта и контрольного опыта, растворяют в
400 мкдм3ацетонитрила (микрошприцем).
Полученные растворы делят на две части, отбирая меньшую часть (40 мкдм3) в пробирку или
грушевидную колбу.
Вусловиях, указанных в п. 3.2.4, записывают хроматограммы пробы продукта, пробы контроль
ного опыта и хроматограмму раствора 3.4-бензпнрена концентрации 0,25 мкг/см3. Отмечают время
выхода 3.4-бензпирена.
В оставшиеся части проб продукта и контрольного опыта (360 мкдм3) делают добавку 10—
20 мкдм3 раствора 3.4-бензпирена концентрации 5 мкг/см3. Полученные растворы вновь вводят в
хроматограф.
Все хроматограммы записывают дважды. Измеряют площади пиков 3.4-бензпирена. За окон
чательный результат принимают среднее арифметическое значение плошади. рассчитанное из двух
хроматограмм.
3.3.3. Количественноеопределение3,4-бензпиренаметодом спектрофлуориметрии при комнатной
температуре
Я™ количественной оценки содержания 3,4-бензпирена при использовании метода спектро-
10
104