ГОСТ 34900—2022
А.3.2 Приготовление субстрата
В емкость блендера помещают 300 см3раствора эмульгатора (А.3.1) (три части по объему) и 100 см3 олив
кового масла (одна часть по объему). Емкость блендера помещают в водяную баню с температурой от 8 °С до 10
°С так, чтобы содержимое емкости было полностью закрыто водой, и перемешивают в блендере со скоростью 12
000—16 000 об/мин в течение 10 мин. Затем полученный субстрат выдерживают в холодильнике при темпе ратуре
от 8 °С до 10 °С в течение 60 мин. Перед использованием субстрата необходимо убедиться в отсутствии
расслоения эмульсии субстрата.
А.3.3 Приготовление раствора фенолфталеина
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 1,0 г фенолфталеина, приливают 70 см3этилового спирта
и перемешивают до растворения. Объем раствора доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.
Раствор хранят в холодильнике не более шести месяцев.
А.3.4 Приготовление раствора гидроокиси натрия молярной концентрации с (NaOH) = 0,05 моль/дм3
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят (500 ± 1) см3 раствора гидроокиси натрия молярной концен
трации c(NaOH) = 1 моль/дм3, приготовленной по ГОСТ 25794.1—83 (подраздел 2.2) или из стандарт-титра гидро
окиси натрия согласно инструкции, прилагаемой к стандарт-титру.
Доводят объем до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.
Раствор гидроокиси натрия хранят в закрытой емкости в холодильнике не более двух месяцев.
А.3.5 Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрации с (HCI) = 0,05 моль/дм3
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят (500 ± 1) см3 раствора соляной кислоты молярной концен
трации c(HCI) = 0,1 моль/дм3, приготовленной по ГОСТ 25794.1—83 (подраздел 2.1) или из стандарт-титра соляной
кислоты согласно инструкции, прилагаемой к стандарт-титру.
Доводят объем до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают. Раствор соляной кислоты
хранят в закрытой емкости, не более шести месяцев.
А.3.6 Приготовление буферного раствора
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,019 г лимонной кислоты и 0,014 г фосфорнокислого двуза-
мещенного натрия, добавляют 60 см3 дистиллированной воды, перемешивают и доводят до метки дистиллирован
ной водой.
А.3.7 Приготовление смеси этилового спирта с ацетоном
Смесь спирта с ацетоном готовят по объему из одной части этилового эфира и одной части ацетона.
А.4 Выполнение определения
При основном определении в коническую колбу вместимостью 50 см3вносят 5 см3 раствора субстрата (А.3.2)
и 4 см3буферного раствора (А.3.6), встряхивают и выдерживают на водяной бане при температуре (37 ± 0,5) °С
в течение 10 мин. Затем добавляют 1 см3 раствора липазы (6.2.4), сразу встряхивают и выдерживают при темпе
ратуре (37 ± 0,5) °С в течение 20 мин для гидролиза субстрата. Добавляют 10 см3 смеси этанола (95 %) и ацето
на (1:1 по объему), встряхивают. Затем добавляют 10 см3 раствора гидроокиси натрия молярной концентрации
c(NaOH) = = 0,05 моль/дм3и 10 см3смеси этилового спирта и ацетона (А.3.7), встряхивают. К полученному раствору
добавляют две-три капли раствора индикатора фенолфталеина (А.3.3) и при постоянном перемешивании
быстро титруют раствором соляной кислоты молярной концентрации c(HCI) = 0,05 моль/дм3 до исчезновения
розовой окраски, устойчивой в течение 30 с.
Параллельно с основным определением выполняют контрольное определение следующим образом. В ко
ническую колбу вместимостью 50 см3 вносят 5 см3раствора субстрата (А.3.2) и 4 см3буферного раствора (А.3.6),
встряхивают и выдерживают на водяной бане при температуре (37 ± 0,5) °С в течение 10 мин. Затем добавляют 10
см3смеси этанола (95 %) и ацетона (1:1 по объему), 1 см3раствора липазы (6.2.4), сразу встряхивают. Добавля ют 10
см3раствора гидроокиси натрия молярной концентрации c(NaOH) = 0,05 моль/дм3, две-три капли раствора
индикатора фенолфталеина (А.3.3) и при постоянном перемешивании быстро титруют раствором соляной кислоты
молярной концентрации c(HCI) = 0,05 моль/дм3до исчезновения розовой окраски, устойчивой в течение 30 с.
А.5 Обработка результатов
А.5.1 Активность липазы Ап, единиц/г, вычисляют по формуле
50-(а-Ь)
20 М
(А.1)
где а — объем раствора соляной кислоты, использованный при контрольном определении, см3;
Ь — объем раствора соляной кислоты, использованный при основном определении, см3;
М — количество липазы в 1 см3 раствора (6.2.4), г.
20 — время гидролиза раствора субстрата, мин.
13