ГОСТ 34900—2022
П р и м е ч а н и я
1 Для растительных масел и жиров с температурой плавления более 60 °С пробирки в течение короткого
времени нагревают до температуры 80 °С для полного растворения. Температура вспышки изооктана минус 9 °С.
2 Для улучшения растворимости добавляют 1 см3 изооктана.
6.4.2 Ферментный гидролиз эфиров жирных кислот 2-МХПД, эфиров жирных кислот
3-МХПД и ГЭ жирных кислот
В пробирку с винтовой крышкой с образцом (6.4.1) вносят 3 см3 раствора бромида натрия, со
держащего липазу Candida cylindracea (6.2.4), закрывают винтовой крышкой и встряхивают пробирку на
высокоскоростном смесителе при комнатной температуре (25 ± 2) °С в течение 30 мин.
П р и м е ч а н и е — Встряхивание с использованием виброцентрифуги для гидролиза можно проводить при
температуре от 25 °С до 40 °С.
6.4.3 Пробирку центрифугируют при 3000 об/мин в течение 2 мин, затем нагревают ее на водяной
бане при температуре 80 °С в течение 10 мин. После нагревания пробирку охлаждают до комнатной
температуры на воздухе или водой.
6.4.4 Затем в пробирку добавляют 0,05 см3 смеси внутренних стандартов (2,0 мкг/см3) (6.3.9) и
перемешивают с помощью вихревого смесителя в течение 10 с (схема приготовления образца в соот
ветствии с приложением Б, пробирка а).
П р и м е ч а н и е — После стадий гидролиза и бромирования определяемые вещества в свободной форме
переходят в водный слой. Для масел и жиров, содержащих жирные кислоты с короткой или средней цепью (мо
лочный жир, кокосовое масло), следует проводить промывку диэтиловым эфиром для удаления жирных кислот
с короткой и средней цепью из водного слоя. После добавления смеси внутренних стандартов в пробирку вносят 3
см3 диэтилового эфира и перемешивают содержимое с помощью вихревого смесителя в течение 10 с. Затем
центрифугируют при 3000 об/мин в течение 2 мин и удаляют верхний слой при помощи пипетки Пастера.
6.4.5 Добавляют в пробирку 3 см3 н-гексана, закрывают винтовой крышкой и перемешивают со
держимое с помощью вихревого смесителя в течение 10 с. Затем центрифугируют при 3000 об/мин в
течение 2 мин (схема приготовления образца в соответствии с приложением Б, пробирка б).
6.4.6 Переносят водный (нижний) слой, содержащий исследуемые вещества в свободной форме,
в новую пробирку при помощи пипетки Пастера (схема приготовления образца в соответствии с при
ложением Б, пробирка в). Вносят 3 см3 н-гексана к водному слою в новой пробирке и
перемешивают содержимое с помощью вихревого смесителя в течение 10 с (схема приготовления
образца в соответ ствии с приложением Б, пробирка г). Если нет четкого разделения верхнего и
водного слоев, центрифу гируют пробирку при 3000 об/мин в течение 2 мин. Удаляют верхний и
средний (межфазная граница) слои при помощи пипетки Пастера (схема приготовления образца в
соответствии с приложением Б, пробирка д).
П р и м е ч а н и е — При введении конца пипетки Пастера в водный слой необходимо нажать на грушу для
предотвращения попадания в пипетку верхнего и среднего слоев, содержащих продукты разложения липазы и
образца. Отбирают только водный слой (насколько это возможно) и переносят его в новую пробирку. В качестве
альтернативы, вместо переноса водного слоя в новую пробирку, верхний и средний слои можно извлечь из пробир ки
при помощи пипетки Пастера. В любом случае необходимо соблюдать осторожность для сведения к минимуму
потери водного слоя.
6.4.7 Вносят 0,1 см3 раствора ФБК (6.2.5) к оставшейся водной фазе, содержащей исследуемые
вещества в свободной форме, перемешивают содержимое с помощью вихревого смесителя в тече
ние 10 с (схема приготовления образца в соответствии с приложением Б, пробирка д). Вносят 3 см3
н-гексана и закрывают винтовой крышкой. Встряхивают пробирку на высокоскоростном смесителе при
комнатной температуре в течение 10 мин для проведения дериватизации при помощи ФБК (схема при
готовления образца в соответствии с приложением Б, пробирка е). После дериватизации фенилборные
производные определяемых веществ распределятся в верхнем слое. Если в верхнем слое происходит
гелеобразование или образование пузырьков, необходимо перемешать содержимое с помощью вих
ревого смесителя в течение 10 с и центрифугировать при 3000— 3500 об/мин в течение от 1 до 10 мин
(схема приготовления образца в соответствии с приложением Б, пробирка ж).
6.4.8 Переносят верхний слой, содержащий фенилборные производные определяемых веществ
при помощи пипетки Пастера в новую пробирку, содержащую небольшое количество сульфата натрия
(схема приготовления образца в соответствии с приложением Б, пробирка и). Концентрируют объем
пробы до 0,3— 0,5 см3 в потоке азота при 40 °С, не допуская бурного кипения и брызг. Перемешивают
7