ГОСТ Р 57477—2017
7.4 Подготовка растворов роактивов из комплекта реагентов для ферментативного
анализа (см. 5.36)
7.4.1 Подготовка реактива 1 (фосфатно-триэтаноламинный буфер с pH 8.6 ед. pH)
Реагент 1 применяют без разбавления. Срок хранения реактива 1 при температуре 4 °С — не
более 12 мес. Перед проведением определения реактив 1доводятдо температуры от 20 °Сдо 25 °С.
7.4.2 Приготовление реактива 2 (раствор смеси диафоразы и НАД)
Вофлаконс 35 мг реагента 2 добавляют2,5 см3бидистиллированной воды иперемешивают. Срок
хранения реактива 2 при температуре от 2 °С до 8 °С — три месяца, а при температуре от 20 °С до 25
°С — один месяц. Перед проведением определения реактив 2 доводят до температуры от 20 °С до 25 °С.
7.4.3 Приготовление реактива 3 (INT)
Вофлаконс 2.5см3реагента 3добавляют6 см3бидистиллированной воды. Срокхраненияреакти
ва3 втемном месте при температуреот2X до8 гС — неболееодной недели. Передпроведениемопре
деления реактив 3доводятдо температуры от 20 °С до 25 вС.
7.4.4 Приготовление реактива 4 (ГБДГ)
Реагент 4 применяют без разбавления. Срок хранения реактива 4 при температуре 4 °С — не
более 12 мес. Перед проведением определения реактив 4доводятдо температуры от 20 °С до 25 °С.
7.5 Приготовление растворов реактивов для ферментативного анализа в лабораторных
условиях
7.5.1 Приготовление раствора гидроокиси калия молярной концентрацией 2 моль/дм3
В мерной колбе вместимостью 500см3растворяют56.1 ггидроокиси калия (см. 5.29)вдистиллиро
ваннойводе.доводятобъем раствора водой до 500см3.Растворхранят вплотнозакрытойполиэтилено
вой посуде. Срокхранения — 4 мес.
7.5.2 Приготовление фосфатно-триэтаноламинного буфера с активной кислотностью
pH 8.6 ед. pH (реактив 1)
7.5.2.1 В мерной колбе вместимостью 100 см3растворяют 1.86 г гидрохлорида триэтаноламина
(см. 5.42) в дистиллированной воде, доводят активную кислотность раствора до 8.6 ед. pH раствором
гидроокиси калия молярной концентрацией 2 моль/дм3(см. 7.5.1), используя для измерений рН-метр.
Затемдобавляют0,68г ТритонаХ-100(см. 5.40) идоводятобъем растворадо 100 см3дистиллированной
водой.
7.5.2.2 В стакане вместимостью 150 см3 растворяют в дистиллированной воде 8,6 гдвузамещен-
ногофосфорнокислогокалия(см. 5.30). В стаканевместимостью25см3растворяютвдистиллированной
воде 0,070 г однозамещеииого фосфорнокислого калия (см. 5.31). Содержимое обоих стаканов перено
сят в мерную колбу вместимостью 1000 см3 и доводят объем раствора дистиллированной водой до
1000 см3.
7.5.2.3 Реактив 1 получают смешиванием 20 см3раствора по 7.5.2.1 и 5 см3раствора по 7.5.2.2.
Реактив 1хранятпритемпературе4 °С. Срокхранения — не более 12 мес.
7.5.3 Приготовление реактива 2 (раствор смеси диафоразы и НАД)
7.5.3.1 В конической колбе со шлифом вместимостью 50 см3 (см. 5.16) взвешивают 0.135 г НАДН
(см. 5.41).добавляют 30 см3 бидистиллированной воды и перемешивают. Растворхранят при темпера
туре4 SC. Срокхранения — не болееодного месяца.
7.5.3.2 Лиофилизованную диафоразу (см. 5.37) растворяют в растворе НАДН (см. 7.5.3.1). массу
лиофилизированной диафоразы и объем раствора НАДН выбирают так, чтобы удельная активность
диафоразы в полученном растворе была равна 1.6 U/см3(реактив 2). Срокхранения полученного реак
тива 2 при температуреот 2 °С до 8 °С — два месяца.
7.5.4 Приготовление реактива 3 (INT)
В стаканевместимостью25 см3взвешивают0.150г INT(см.5.39)ирастворяютвбидистиллирован
ной воде. Содержимое стакана переносятв мерную колбу вместимостью250 см3,доводятобъем бидис
тиллированной водой до 250 см3, перемешивают и колбу плотно закрывают пробкой. Реактив
3хранят при температуре 4 °С в темноте. Срокхранения — два месяца.
7.5.5 Приготовление реактива 4 (ГБДГ)
Используют готовую суспензию ГБДГ (см. 5.38) активностью не менее 15 U/см3. Срок хранения в
ампулах при температуреот 2 °С до 8 5Сне более 12 мес. после вскрытия ампулы — не более 6 мес.
5