ГОСТ Р 57477—2017
Приложение А
(обязательное)
Графический метод экстраполяции для определения изменения оптической плотности ДА
При замене наборов реактивов, используемых для ферментативной реакции, а также при значительных
изменениях во времени ДА (через 20 и через 10 мин после добавления фермента ГБДГ) используют графический
метод определения величины лЛа. экстраполированной к началу ферментативной реакции: через 5
— 6
мин после
внесения реактива 4 (см.
8
.
6
). а затем через каждые 2 мин измеряют оптические плотности раствора с пробой А и
контрольного раствора В и строят график зависимости от времени t разности оптических плотностей
ДА» (А ,-А ,
Ы В , - В 1
Ь(*■!>
где А, и В, — оптические плотности раствора с пробой и контрольного раствора в момент времени t после добавле
ния реактива 4 (фермента ГБДГ) (см. 7.4.4 или 7.5.5):
А, и в , — соответствующие оптические плотности растворов непосредственно до добавления реактива 4.
Измерения продолжают до достижения линейной зависимости ДА отвремени а течение не менее 4 мин. Зна
чение ААЭопределяют по графику экстраполяцией линейного участка к началу реакции согласно рисунку А.1 и
используют для расчета содержания D-бета-оксимасляной кислоты по формуле (
6
).
1— график зависимости в случае наложения наферментативную реакцию медленно текущей побочной реакции:
2
— график зависимости при отсутствии побочных реакций
Рисунок А.1 — Графическое определение разности оптической плотности, экстраполированной
к началу ферментативной реакции
12