ГОСТ Р 51939-2002
Образовавшийся в ходе реакции (6) Ф -6-Ф после добавления ФГИ изомеризуется (8) в Г-6-Ф .
который окисляется в ходе реакции (7). Массовую долю НЛДФН. эквивалентную массовой доле
фруктозы, измеряют по величине оптической плотности при длинах волн 334. 340 или 365 нм.
ФГИ
Ф -6-Ф <-----------> Г-6-Ф(8)
Для предотвращения влияния свободной фруктозы, которая может находиться в исследуемой
пробе, при проведении контрольного определения не проводят гидролиз лактулозы с помощью ГЗ.
Массовую долю лактулозы рассчитывают по разности оптических плотностей раствора пробы и
контрольного раствора.
5 Реактивы
При проведении анализа используют реактивы х.ч. или ч.д.а.
Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть бндистиллированной.
Вода, используемая для приготовления растворов химических реагентов и подготовки проб,
должна быть дистиллированной по ГОСТ 6709 или деминерализованной.
Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов для определения
лактулозы при условии соответствия их качества требованиям настоящего стандарта.
5.1 Раствор сернокислого цинка
30 г сернокислого цинка по ГОСТ 4174 (Z nS04-7H20 ) растворяют в 100 см3дистиллированной
воды.
5.2 Раствор гсксацнано-(Н)-феррата калия
15 г гексациано-(И)-феррата калия (K4|Fe(CN)6|ЗН: 0 ) по ГОСТ 4207 растворяют в 100 см5
дистиллированны! воды.
5.3 Буферный раствор А активной кислотностью 7,5 pH
4.80 г гидрофосфата натрия (Na2H P04) по ГОСТ 4172, 0,86 г дипирофосфата натрия
(NaH: POi 2Н.О) по ГОСТ 245 и 0,10 г сернокислого магния по ГОСТ 4523 растворяют в 80 см ’
дистиллированной воды. Значение активной кислотности раствора доводят до 7,5 pH, добааляя
раствор гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 молярной концентрации e(N aOH ) = 1 моль/дм3. Объем
раствора доводят дистиллированной водой до 100 см3. Приготовленного количества буферного
раствора Л достаточно для 15 определений.
5.4 Буферный раствор Б активной кислотностью 7,6 pH
14,0г триэтаноламингидрохлорида 111 и 0,25 г сернокислого магния по ГОСТ 4523 растворяют
в 80 см3 дистиллированной воды. Активную кислотность раствора доводят до pH 7,6 добааляя
раствор гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 молярной концентрации
с
(NaOH) = 1 моль/дм3. Объем
раствора доводят дистиллированной водой до 100.0 см3. Приготовленного количества раствора
достаточно для 60 определений.
5.5 Буферный раствор В
40 см3 буферного раствора Б по 5.4 разбавляют дистиллированной водой до 100 см3. Приго
товленного количества раствора В достаточно для 50 определений.
5.6 Натрий углекислый кислый. NaHCO, по ГОСТ 4201.
5.7 Раствор пероксида водорода по ГОСТ 10929 массовой долей 30
%.
5.8 Октанол-1 |2].
5.9 Гидроокись натрия по ГОСТ 4328, раствори молярных концентраций с (NaOH) =
= 0,33 моль/дм3 и
с
(NaOH) = I моль/дм3.
5.10 Суспензия ГЗ
Сухой лиофилизат ГЗ (ЕС 3.2.1.23) из E.coli |3| массой 0.005 г и активностью 150 Е суспенди
руют в I см ! раствора сернокислого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации
с
((NH4)2S 0 4) = 3,2 моль/дм3 (температура ферментативного гидролиза лактозы в качестве субстра та
— 25 *С). Допускается использовать препарат ГЗ с более высокой активностью — 1500 Е (темпе
ратура ферментативного гидролиза 2-нитрофенил-р-О-галактозида в качестве субстрата — 37 *С).
Суспензия устойчива при температуре 4 "С не менее 12 мес.
5.11 Препарат ГОД
Сухой лиофилизат ГОД (ЕС 1.1.3.4) |3| из Aspergillus niger второй степени очистки удельной
активностью 200 Е/мг (температура ферментативного окисления глюкозы в качестве субстрата —
3