ГОСТ Р 51939-2002
3.2 В настоящем стандарте применяют следующие обозначения и сокращения:
НЛДФР-никотинамидадениндннуклеотидфосфат;
НЛДФН — р-никотинамидадениндинуклеотидфосфат, восстановленная форма;
ГЗ — Р-галактозидаза;
ГОД — глюкозооксидаза;
АТФ — аденозино’-трифосфат;
АДФ — аденозин-5’-днфосфат:
Г-6-Ф — глюкозо-6-фосфат;
Ф -6-Ф — фруктозо-6-фосфат;
ГК — гексокиназа;
Г6Ф-ДГ — глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа;
ФГИ — фос(|юглюкозоизомераза;
КАТ — каталаза;
Е — международная единица, определяющая количество (активность) фермента, который слу
жит катализатором для превращения 1 мкмоля вещества в минуту при 25 "С.
4 Сущность метода
4.1 Сущность метода
Метод основан на гидролизе лактулозы и лактозы 11|, содержащихся в освобожденном от жира
и белка водном экстракте пробы молока, в присутствии ГЗ с образованием моносахаров — галакто
зы, глюкозы и фруктозы; преобразовании фруктозы под действием НЛДФ в присутствии ГК. ФГИ
и Г6Ф-ДГ и фотометрическом измерении массовой доли образовавшегося НЛДФН, эквивалентного
массовой доле фруктозы, и расчете содержания лактулозы по разности оптических плотностей
раствора пробы, в которой лактулоза подвергнута гидролизу, и раствора пробы, используемого
при определении свободной фруктозы.
ГЗ
лактулоза + Н ,0 <
-----------
> галактоза + фруктоза
0 )
ГЗ
лактоза + Н20 < -----------> галактоза + глюкоза
(2)
В связи с тем, что в молоке содержится значительно больше лактозы чем лактулозы (массовые
концентрации лактулозы в молоке приведены в приложении А), избыток глюкозы, образующейся
при пиролизе лактозы, окисляют кислородом поздуха в присутствии ГОД и КЛТ.
глюкоза + Н20
ГОД
+ О, <
-----------
> глюконовая кислота + Н ,0 2(3)
КАТ
2Н ,0, <
-----------
> 2Н ,0 + 0 2(4)
Неокисленную глюкозу, а также фруктозу, образовавшуюся в ходе пиролиза лактулозы.
подвергают фосфорилированию под действием ЛТФ в присутствии ГК.
ГК
глюкоза + АТФ <
-----------
> Г-6-Ф + АДФ
(5)
ГК
фруктоза + ЛТФ <
-----------
> Ф -6-Ф + АДФ(6)
Образовавшийся Г-6-Ф под действием НЛДФ в присутствии Г6Ф-ДГ окисляют до глюконат-
6-фосфата. Количество восстановленной формы НЛДФН измеряют по величине оптической плот
ности при длинах волн 334, 340 или 365 нм.
Г6Ф-ДГ
Г-6-Ф + НЛДФ* <
-----------
> глюконат-6-фосфат + НЛДФН + Н*(7)
•>