ГОСТ 33675—2015
Взвесь культуры бруцелл подсушивают при комнатной температуре в течение 18 — 20 ч. в
объеме 0,4 - 0.5 см3 наносят на поверхность МППГГА в чашках Петри и тщательно распределяют по
его поверхности. Избыток посевного материала удаляют пастеровской пипеткой.
Засеянные чашки Петри подсушивают в течение 1 ч при температуре 37 °С — 38 °С до полного
впитывания в агар посевного материала. После чего на поверхность питательной среды в два раз ных
места наносят пастеровской пипеткой по одной капле 0,05 см3 бактериофага кахщого разведе ния.
Чашки наклоняют, чтобы капли бактериофага стекли по поверхности питательной среды двумя
дорожками. Контролем являются посевы культуры бруцелл на среде без внесения бактериофага.
Посевы помещают в термостат агаром вверх и инкубируют в течение четырех —пяти суток при тем
пературе 37 °С — 38 °С.
9.3.4.3 Учет результатов
Результаты исследования учитывают в крестах:
- полный лизис культуры на месте нанесения фага {или линии стекания) «♦+++»;
- лизис с небольшим количеством отдельных колоний бруцелл или слившиеся бляшки (участок
лизиса) в виде сот «+♦+»;
- резко ослабленный рост культуры бруцелл и небольшое количество бляшек «++»;
- очень слабый лизис культуры бруцелл «+»;
- отсутствие лизиса культуры бруцелл «-».
За положительный результат чувствительности к лизису фагом принимают лизис культуры бру
целл не менее чем на два креста.
Дифференциальные свойства видов и биоваров рода Brucella приведены в приложении А.
10 Биологический метод
10.1 Подготовка к исследованию
Для постановки биологической пробы используют морских свинок (не менее двух животных), не
реагирующих на бруцеллез при серологическом исследовании в пробирочной РА. Пробы сыворотки
крови от животных в разведении 1:5 не должны агглютинировать S-бруцеллезный антиген.
10.2 Проведение исследования
Из органов и содержимого желудка абортированного плода готовят суспензию на стерильном фи
зиологическом растворе в соотношении 1:10 и вводят морской свинке подкожно с внутренней стороны
бедра в объеме 1см3.
Из плаценты и плодовых оболочек, предварительно обработанных тампонами, смоченными де
зинфицирующим раствором, и подсушенных сухими стерильными тампонами, вырезают кусочки раз
мером 0.5 х 0,5 см. фламбируют на пламени горелки, растирают в фарфоровой ступке со стерильным
леском или гомогенизируют и заливают физиологическим раствором в соотношении 1:10. Получен
ную суспензию вводят морской свинке подкожно в объеме 1 см3.
Содержимое гигром, бурс вводят морским свинкам подкожно в объеме 0.2 — 0,3 см3. При этом
необходимо учитывать возможность гибели животного от сопутствующей микрофлоры, особенно
стрептококков.
Пробы молока центрифугируют в течение 30 мин при 3000 об.Умин. Морской свинке вводят под
кожно 2 — 3 см3материала из верхнего слоя (сливки) и осадка молока после центрифугирования.
Через 15, 25 и 40 сут после заражения у морских свинок берут кровь в объеме 1 — 2 см3из уш
ной вены путем надреза или из сердца путем пункции и готовят сыворотку, которую исследуют в РА в
пробирках в разведениях от 1:10 до 1:80.
При положительной реакции агглютинации в разведении 1:10 и выше морских свинок убивают. В
случае необходимости получения культуры возбудителя материал от них исследуют бактериологиче
ски (раздел 8). Высевы делают пастеровскими пипетками в одну пробирку с бульоном и две пробирки с
агаром из паховых, подчелюстных, заглоточных, парааортальных лимфатических узлов (правых и
левых), селезенки (два высева), печени и костного мозга. Посевы культивируют по 8.3.8.
10.3 Учет результатов
При отрицательной РА у морских свинок биопробу считают отрицательной, подопытных живот
ных убивают, бактериологическое исследование не проводят.
При выделении культуры бруцелл на питательных средах биологическое исследование прекра
щают, а ранее зараженных морских свинок убивают.
Результат исследования на бруцеллез считают положительным при получении у морской свин
ки положительной РА в разведении сыворотки крови 1:10 и выше, даже если из исходного материала
культура бруцелл не выделена.
14