ГОСТ 33675—2015
Если после нанесения раствора
Л
юголя мазок не чернеет, то необходимо приготовить новый
раствор.
7.3.2 Окрашивание по Козловскому
Для окраски по Козловскому фиксированный мазок по 7.2.2 окрашивают 2 %-ным водным рас
твором сафранина с подогреванием на водяной бане до появления пузырьков. Мазок промывают
дистиллированной водой и дополнительно окрашивают 0,75 %-ным или 1 %-ным водным раствором
малахитового золеного в течение 0.5 —1,0 мин. Краску сливают, промывают дистиллированной водой и
просушивают мазок фильтровальной бумагой.
7.3.3 Окрашивание по Стампу
Для окраски по Стампу фиксированный мазок по 7.2.2 окрашивают в течение 10 мин карболо
вым фуксином Циля, разведенным no 7.2.1.3 в соотношении 1:10. Мазок промывают дистиллирован
ной водой, а затем 0,5 %-ным раствором уксусной кислоты в течение 30 с. Вновь тщательно промы
вают дистиллированной водой и докрашивают 1 %-ным раствором метиленового синего в течение
20 — 30 с. Краску сливают, промывают дистиллированной водой и просушивают мазок фильтроваль
ной бумагой.
7.3.4 Полученные по 7.3.1 — 7.3.3 мазки микроскопируют под иммерсионным маслом.
7.4 Обработка результатов
При микроскопии окрашенных мазков, содержащих бруцеллы. должны наблюдаться мелкие,
грамотрицательные, расположенные отдельно, попарно или кучно коккобактерии. окрашенные в
красный цвет.
8 Культуральный метод
8.1 Сущность метода
Сущность культурального метода заключается в посеве патологического материала на пита
тельные среды с последующим культивированием, идентификацией и дифференциацией выделен
ной культуры.
8.2 Подготовка к исследованию
8.2.1 Приготовление мясной воды
Для приготовления мясной воды свежее мясо крупного рогатого скота освобождают от костей,
жира и сухожилий и пропускают через мясорубку. 500 г фарша заливают 1дм3водопроводной воды и
выдерживают в течение 15 — 18 ч в прохладном месте. Затем сливают полученный настой в колбу
вместимостью 2 дм3или кастрюлю из нержавеющей стали вместимостью 3 дм3 и кипятят в течение
30 — 40 мин на электрической или газовой плите, доливают дистиллированную воду до объема 1
дм3и фильтруют через ватно-марлевый или тканевый фильтр. Полученную мясную воду стерилизуют
в автоклаве при температуре 121 °С в течение 20 мин.
Срок хранения мясной воды в стеклянных бутылях вместимостью 5 — 15 дм3при температуре
от 2 °С до 25 °С — не более одного года.
8.2.2 Приготовление печеночной воды
Для приготовления печеночной воды свежую печень крупного рогатого скота освобождают от
жира, канальцев, пленок и пропускают через мясорубку. В емкость из нержавеющей стали с крышкой
вместимостью 3 дм3вносят 500 г фарша, заливают 1 дм3водопроводной воды, настаивают в течение 1 ч
и кипятят на электрической или газовой плите при периодическом помешивании в течение 30 мин. После
отстаивания фарш удаляют, а полученную жидкость доводят до 1 дм3 дистиллированной во дой и
фильтруют через ватно-марлевый фильтр или тканевый фильтр. Полученную печеночную воду
разливают по колбам и стерилизуют при температуре 115 °С и давлении 0,07 МПа в течение 30 мин.
Срок хранения печеночной воды в стеклянных бутылях вместимостью 5 — 15 дм3при темпера
туре от 2 °С до 25 °С — не более одного года.
8.2.3 Приготовление МППГГБ
В емкость из нержавеющей стали с крышкой вместимостью 3 дм3наливают 610 см3мясной во
ды по 8.2.1 и 305 см3печеночной воды по 8.2.2,10 г пептона. 5 г хлорида натрия и 20 — 30 г пищево
го или микробиологического агара, предварительно промытого и хорошо отжатого. Смесь кипятят на
электрической или газовой плите в течение 30 мин, устанавливают pH 7,2 — 7.4 10 %-ным раствором
натрия гидроокиси, добавляют 10 г глюкозы и 20 см3глицерина и фильтруют через ватно-марлевый
или тканевый фильтр. Полученную среду разливают в пробирки по 7-8 см3 или во флаконы по
8