ГОСТ 33675—2015
нагретым над пламенем спиртовки. Из каждого объекта проводят посев в одну бактериологическую
пробирку с МППГГБ и после пипетирования полученную взвесь в объеме по 1.0 —1.5 см3переносят на
скошенную плотную питательную среду по 8.2.4 и 8.2.6 в две пробирки.
8.3.3 Если в лабораторию доставлен только желудок плода, высев проводят не менее чем в де
сять пробирок на среды по 8.2.4-8.2.6.
8.3.4 При поступлении нескольких плодов от одного животного посевы делают из органов и тка
ней каждого плода отдельно.
8.3.5 Из плодовых оболочек вырезают кусочки тканей с утолщенными ворсинками и стенками,
наличием на поверхности фибрина или гнойного экссудата (выбирают менее загрязненные участки
без некротических изменений).
Для уничтожения посторонней микрофлоры кусочки плаценты помещают в чашку Петри и зали
вают 3 %-ным раствором гидроокиси калия на 30 мин. Затем их промывают стерильным физиологи
ческим раствором, готовят из этого материала суспензию в гомогенизаторе или в ступке со стериль
ным песком и делают посев пастеровской пипеткой в пробирки со средами по 8.2.3, 8.2.4 или 8.2.6,
содержащими бактериостатические красители: гонцианвиолет в разведении 1:200000 (0,1 см30.5 %-
ного спиртоводного раствора генцианвиолета на 100 см3 среды) или кристаллвиолет в разведении
1:100000. генцианвиолет и малахитовую зелень в разведении каждой краски 1:200000. уксуснокислый
натрий из расчета 12.5 мг на 100 см3среды, или селективную добавку, ингибирующую рост посторон
ней микрофлоры и грибов.
8.3.6 Содержимое бурс, гигром и абсцессов высевают на три-четыре чашки Петри с плотной
питательной средой по 8.2.4 и 8.2.6. содержащей бактериостатические красители Во всех случаях
вместо бактериостатических красителей допускается применение селективных добавок.
8.3.7 Пробы молока центрифугируют в течение 30 мин при 3000 об./мин. Верхний слой (сливки) и
осадок набирают в пастеровскую пипетку и по 0.1 —0.2 см3вносят в три-четыре чашки Петри со сре
дами по 8.2.4 и 8.2.6. содержащими бактериостатические красители или селективные добавки.
8.3.8 Для выделения культуры бруцелл. в том числе и Brucella canis. кровь от животных с анти
коагулянтом вносят по 10 —18 см3во флаконы, содержащие по 100 см3МППГГБ. и по 0.3 —0.5 см3 в
чашки Петри с плотной питательной средой по 8.2.4 и 8.2.6. Посевной материал равномерно распре
деляют по поверхности питательной среды. Через 25 —30 мин чашки Петри помещают в термостат
при температуре 37 °С — 38 °С агаром вверх. Туда же помещают и флаконы с посевами.
Через семь суток инкубирования из посевов во флаконах делают пересев на три пробирки с
плотной питательной средой по 8.2.4 и 8.2.6 и инкубируют при тех же условиях.
8.3.9 При исследовании материала от крупного рогатого скота половину пробирок и чашек Пет
ри культивируют в термостате при температуре 37 °С — 38 °С. другую — в С02-инкубаторе с содер
жанием 5 % — 10 % углекислого газа или эксикаторе (микроанаэростате).
П р и м е ч а н и е — Допускается культивирование в пробирках, которые плотно укупоривают резиновы
ми пробками и заливают парафином или обертывают ватно-марлевые пробки парафильмом.
8.3.10 Необходимое содержание углекислого газа в эксикаторе можно получить путем:
- внесения бикарбоната натрия и серной или соляной кислоты (0.48 г бикарбоната натрия и
5 см325 %-ного раствора кислоты или 0.4 г бикарбоната натрия и 0.35 см3концентрированной соля
ной кислоты на 1 дм3объема);
- сжигания ваты, смоченной спиртом. При этом пробирки и чашки с посевами должны занимать
не более половины объема эксикатора.
8.3.11 Посевы, полученные по 8.3.1 —8.3.9. выдерживают в термостате при температуре 37 °С
— 38 °С в течение 30 сут. Первичный осмотр посевов проводят через 48 — 72 ч. При отсутствии рос
та часть поверхности агара орошают посевным материалом.
В последующем посевы просматривают каждые 4 сут визуально, при необходимости через лупу
или малом увеличении микроскопа.
При значительном росте посторонней микрофлоры (80 % и более засеянных пробирок) бакте
риологическое исследование прекращают.
8.4 Учет результатов
8.4.1 При просмотре посевов обращают внимание на характер роста бактерий.
8.4.2 На поверхности твердых питательных сред по 8.2.4 и 8.2.6 бруцеллы образуют мелкие,
блестящие, выпуклые, с ровными краями и гладкой поверхностью бесцветные колонии, имеющие в
отраженном свете голубоватый оттенок, в падающем свете —сероватый. При длительном культиви
ровании колонии мутнеют и приобретают более темную окраску, что связано с появлением пигмента.
8.4.3 В жидких питательных средах по 8.2.1. 8.2.3 и 8.2.5 бруцеллы образуют равномерное помут
нение и пристеночное кольцо, возвышающееся над поверхностью бульона, а в дальнейшем небольшой
осадок надне пробирки. В отраженном свете пристеночное кольцо имеет голубоватый оттенок.
10