ГОСТ 33675—2015
9.2.2 Реакция термоагглютинации
Взвесь двухсуточной агаровой культуры бруцелл в физиологическом растворе по 9.1.1 с со
держанием по оптическому стандарту мутности 1 млрд/см; микробных клеток в объеме 4-5 см3про
гревают в пробирке вместимостью 20 см5 на водяной бане при температуре 90 °С в течение 30 мин.
Результаты учитывают через 30 мин. 1 ч и через 24 ч при комнатной температуре.
При наличии диссоциации наступает выраженная агглютинация клеток бруцелл с формиро
ванием осадка, тогда как суспензия недиссоциированной культуры бруцелл в S-форме остается
гомогенной.
9.2.3 Окраска колоний по Уайт-Вилсону
Двухсуточную агаровую культуру бруцелл по 9.1.1 разводят физиологическим раствором с та
ким расчетом, чтобы она по мутности соответствовала 10 ЕД оптического стандарта мутности. Полу
ченную суспензию в объеме 3 см3смешивают с 2 см3физиологического раствора и делают десяти
кратные разведения до 10"®, используя для каждого разведения отдельную пипетку, и высевают по
0.1см3на четыре-шесть чашек Петри с МППГГА. Поверхность агара в чашках равномерно орошают
посевным материалом, выдерживают на горизонтальной поверхности стола в течение 20-30 мин и
инкубируют при температуре 37 °С — 38 °С агаром вверх в течение 4-5 сут.
Окраску колоний проводят рабочим раствором кристаллического фиолетового, приготовленного
по 7.2.1.1 в разведении 1:2000. В чашку Петри с изолированными колониями бруцелл пастеровской
пипеткой с грушей вносят осторожно без напора рабочий раствор кристалвиолета. Через 30 с раствор
краски удаляют с помощью пипетки с грушей, сливая в дезинфицирующую жидкость (3 %-ный раствор
фенола или 5 %-ный раствор хлорамина). Колонии просматривают под бинокулярной лупой.
Колонии бруцелл в R-форме (диссоциированные) имеют равномерно окрашенный широкий пе
риферический ободок синего или фиолетового цвета и менее интенсивно окрашенную поверхность
такого же цвета, иногда с исчерченностью.
Колонии бруцелл в S-форме имеют тонкий периферический ободок, окрашенный в синий или
фиолетовый цвет. Центральная часть колоний светло-желтого цвета (не окрашивается).
9.3 Методы дифференциации бруцелл
Для дифференциации бруцелл используют следующие тесты:
- рост в присутствии С02:
- образование H2S;
- устойчивость к фуксину и тионину;
- способность аглютинироваться монорецепторными А. М и R бруцеллезными сыворотками;
- лизироваиио фагом.
9.3.1 Образование сероводорода (H2S)
9.3.1.1 Подготовка к исследованию
В качестве реактива применяют насыщенный водный раствор уксуснокислого свинца (30 г свинца
растворяют в 100 см3 дистиллированной воды), которым пропитывают полоски фильтровальной бума ги
размером 1 * 8 см. Пропитанные полоски фильтровальной бумаги высушивают при температуре 18°
С — 20 °С в течение 20 мин.
Срок хранения пропитанных полосок фильтровальной бумаги в банке из темного стекла с при
тертой пробкой — не более 2 мес.
9.3.1.2 Проведение исследования
Двухсуточную взвесь культуры бруцелл по 9.1.1 в физиологическом растворе концентрацией
2 * Ю’/см^ микробных клеток по оптическому стандарту мутности на 10 ЕД засевают в пробирку бак
териологической петлей на скошенную поверхность печеночного агара по 8.2.4. Полоску фильтро
вальной бумаги зажимают между пробиркой и ватной пробкой так, чтобы нижний ее конец свободно
свисал над верхним краем посева и не касался поверхности питательной среды.
Ватная пробка должна быть рыхлой, не задерживать выхода из пробирки углекислоты.
Пробирки с посевами помещают в термостат при температуре 37 °С — 38 С на 6 сут.
9.3.1.3 Учет результатов
Показателем интенсивности образования сероводорода является почернение нижнего конца
полоски, которое измеряют в миллиметрах.
Результаты учитывают через каждые 2 сут в течение б сут. При каждом учете тест-полоску за
меняют новой. Для окончательной оценки способности культуры к образованию сероводорода полу
ченные три значения суммируют.
Суммарное значение почернения тест-полосок, свидетельствующее о продуцировании серово
дорода, составляет для культур:
- В. suis (биовар 1) — 12-20 мм.
- В. abortus (биовар 1) — 5-7 мм;
12