ГОСТ 33675—2015
250 —300 см3 соответствующей вместимости и стерилизуют при температуре 115 °С и давлении
0.07 МПа в течение 30 мин. pH среды после стерилизации составляет 6.8 —7.0.
Срок хранения МППГГБ в пробирках и флаконах при температуре от 2 °С до 8 °С— не более 3 мес.
8.2.4 Приготовление МППГГА
В емкость из нержавеющей стали с крышкой вместимостью 3 дм3наливают 610 см3мясной во
ды по 8.2.1 и 305
cmj
печеночной воды по 8.2.2, 10 г пептона. 5 г хлорида натрия и 20 —30 г микро
биологического агара, предварительно промытого и хорошо отжатого. Смесь кипятят на электриче
ской или газовой плите в течение 1 ч, устанавливают pH 7,2 —7,4 10 %-ным раствором гидроокиси
натрия и добавляют 10 г глюкозы и 20 см3 глицерина и фильтруют через ватно-марлевый фильтр.
Полученную среду разливают в пробирки или флаконы вместимостью 500 см3 и стерилизуют при
температуре 115 сС и давлении 0,07 МПа в течение 30 мин. pH среды после стерилизации состав
ляет 6.8 —7,0.
Срок хранения МППГГА в пробирках и флаконах при температуре от 2 °С до 8 °С — не более 3 мес.
8.2.5 Приготовление МППБ
МППБ готовят аналогично МППГГА по 8.2.3 без добавления агара, глюкозы и глицерина.
Срок хранения МППБ при температуре от 2 сС до 8 °С — не более 3 мес.
8.2.6 Приготовление сывороточно-декстрозного агара
В емкость из нержавеющей стали с крышкой вместимостью Здм3наливают 835 см3 дистиллиро
ванной воды, добавляют 20 г пищевого или микробиологического агара, 10 г пептона, 5 г хлорида на
трия и 165 см3мясной воды по 8.2.1. Полученную смесь кипятят на электрической или газовой плите
при периодическом помешивании в течение 30 мин до расплавления агара. pH до стерилизации — 7.8.
Затем стерилизуют в автоклаве текучим паром в течение 1 ч. После автоклавирования среду от
стаивают в течение 1 ч, затем фильтруют через ватный или бумажный фильтр, доводят pH среды до
7.2-7,4 10 %-ным раствором гидроокиси натрия, разливают в колбы (пробирки, флаконы) и стерили
зуют при температуре 115 °С и давлении 0,07 МПа в течение 30 мин. После стерилизации pH среды
составляет 6.8 —7.0.
Срок хранения сывороточно-декстрозного агара при температуре от 2 °С до 8 °С —не более 3 мес.
Перед применением среду в колбах (пробирках, флаконах) расплавляют в кипящей водяной ба
не. охлаждают до температуры 50 °С —60 °С и добавляют 40 %-ный стерильный раствор глюкозы в
количестве 1 % к объему питательной среды во флаконе (например. 2,5 см340 %-ного стерильного
раствора глюкозы добавляют к 97.5 см3питательной среды).
8.2.7 Приготовление селективной добавки для внесения в питательные среды
Содержимое флакона по 5.4 растворяют в 5 см350 %-ного метилового спирта и перемешивают
до образования гомогенной суспензии.
Раствор используют свежеприготовленным.
Полученное количество селективной добавки стерильно добавляют к 500 см3 расплавленной
питательной среды.
8.3 Проведение исследования
8.3.1 Перед посевом материала кожу абортированного плода по белой линии живота протирают
тампоном, смоченным 5 %-ным раствором фенола, приготовленного путем растворения 5 г кристал
лического фенола в 100 см5 дистиллированной воды. Стерильными ножницами вскрывают брюшную
стенку и грудную клетку плода, содержимое грудной и брюшной полостей пастеровскими пипетками
высевают в одну бактериологическую пробирку с МППГГБ и после пипетирования полученную взвесь
переносят в объеме по 1,0-1.5 см3 на скошенную плотную питательную среду по 8.2.4 и 8.2.6 в двух
пробирках. Содержимое желудка в объеме по 1 —2 см3высевают в две пробирки с МППГББ и в пять
пробирок на скошенную плотную питательную среду по 8.2.4 и 8.2.6.
8.3.2
Л
имфатические узлы, очищенные от жира и мышечных волокон, кусочки печени и селе
зенки размером 2,0 * 1,5* 2.5 см погружают в 96 %-ный этиловый спирт на 1 с и обжигают, проведя (чад
пламенем спиртовки. После обработки от лимфоузлов стерильными ножницами отрезают кусочки
размером 1 —2 см. Подготовленный материал помещают в пакет для гомогенезации с фильтром, добав
ляют 4 —5 см3физиологического раствора и гомогенезируют с использованием гомогенизатора по 5.1.
Допускается приготовление суспензии путем растирания материала в стерильной фарфоровой
ступке с добавлением физиологического раствора до получения однородной гомогенной суспензии.
Полученный гомогенат высевают пастеровской пипеткой по 0,1 —0,2 см3на поверхность пред
варительно подсушенных после скашивания плотных питательных сред по 8.2.4 и 8.2.6 в пробирках и
на чашки Петри.
Допускается высев материала пастеровской пипеткой непосредственно из лимфатических узлов
и органов. Для этого место прокола пастеровской пипеткой предварительно прижигают шпателем,
9