ГОСТ 33675—2015
8.4.4При обнаружении роста на жидких питательных средах и отсутствии характерного роста на
твердых питательных средах из каждой пробирки готовят мазки, которые окрашивают одним из ме
тодов по 7.3.1—7.3.2. и делают пересев на чашки Петри с твердой питательной средой для выделе ния
чистой культуры. Пересевы на чашках Петри культивируют так же. как и высевы из патологиче ского
материала. При отсутствии роста культуры бруцелл наблюдение за посевами прекращают по
истечении 30 сут.
9 Идентификация выделенных культур
9.1 Пластинчатая реакция агглютинация
9.1.1 Подготовка к исследованию
9.1.1.1 Подготовка двухсуточных культур бруцелл
Для идентификации используют двухсуточные агаровые культуры (изоляты) бруцелл. выделен
ные из патологического материала. С этой целью выделенные культуры пересевают бактериологиче
ской петлей штрихом на поверхность плотной питательной среды по 8.2.4. 8.2.6. скошенной в
про бирках. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37 °С —38 °С в течение двух суток.
Выра щенные культуры исследуют непосредственно после извлечения из термостата.
Примечание —Допустимый срок хранения культур при температуре от 2 °Сдо 8 °С —не более 14 сут.
9.1.1.2 Подготовка R- и S-бруцеллезных агглютинирующих сывороток
R- и S- бруцеллезные агглютинирующие сыворотки разводят 0,5 %-ным фенолизированным фи
зиологическим раствором до рабочего разведения. Разведенные сыворотки хранят при температуре от
2 °С до 8 °С и используют в течение 30 сут.
9.1.2 Проведение исследования
На предметное стекло раздельно наносят по одной капле R- и S-бруцеллезиых сывороток по
9.1.1 и физиологического раствора. Испытуемую культуру бактериологической петлей отдельно пе
ремешивают в капле S-. /^-бруцеллезной сыворотки и физиологического раствора. Параллельно ста
вят контроли: со стандартными S- и R-бруцеллезными сыворотками и гомологичными антигенами.
9.1.3 Учет и оценка результатов реакции агглютинации
При положительной РА в капле сыворотки образуется четко выраженный агглютинат в виде
хлопьев или комочков, а жидкость просветляется, что особенно заметно при покачивании стекла. В
физиологическом растворе наблюдается гомогенная взвесь без признаков просветления жидкости.
Реакцию учитывают визуально в течение 1-3 мин и оценивают в крестах:
- «♦+♦+» (четыре креста) — полное просветление жидкости с образованием четко выраженного
агглютината —положительная реакция;
- «+♦+» (три креста) — неполное просветление жидкости с выраженным агглютинатом —
положительная реакция;
- «++» (два креста) — неполное просветление жидкости со слабо выраженным агглютинатом —
положительная реакция;
- «+» (один крест) — жидкость без просветления с едва заметным агглютинатом —сомнительная
реакция;
- «-» (минус) — просветление жидкости не наступило, смесь гомогенная —отрицательная реакция.
Результаты реакции с испытуемой культурой считают достоверными, если в контролях R- и
S-бруцеллезных сывороток с гомологичными антигенами агглютинация четко выражена не менее чем
на два креста, а с физиологическим раствором — отсутствует.
9.1.4 Обработка результатов
Культуры, обладающие типичными для бруцелл морфологическими, культуральными (см. раз
дел 8) и тинкториальными свойствами (см. раздел 7), а также дающие положительную реакцию агг
лютинации с S- или /?-бруцеллезной сывороткой или с обеими сыворотками одновременно при отсут
ствии самоагглютинации в физиологическом растворе, считают бруцеллами.
9.2 Методы определения диссоциации культур бруцелл
9.2.1 Проба на стекле с раствором акрифлавина
На предметное стекло наносят каплю раствора акрифлавина в разведении 1:1000 в дистилли
рованной воде, в которой суспензируют с помощью бактериологической петли испытуемую культуру. У
диссоциированных культур (R- форма) в течение 1 — 2 мин наступает агглютинация с образова нием
хорошо выраженных хлопьев. Взвесь культур бруцелл в S-форме остается гомогенной.
11