ГОСТ 33675—2015
- В. nootomae -5 -8 мм.
Культура В. meirtensis {биоеар 1). как правило, не образует сероводорода или вызывает только
слабо выраженное почернение тест-полоски. Культуры В. ovis и В .canis сероводород не продуцируют.
9.3.2 Определение редуцирующей активности в отношении красок
9.3.2.1 Подготовка к исследованию
Для приготовления исходных растворов фуксина и тионина в разведении 1:1000 во флаконах
вместимостью 200 см3смешивают 0.1 г краски. 20 см3 96 %-ного этилового спирта и 80 см3дистил
лированной воды.
Срок хранения исходных растворов фуксина и тионина в темном месте — не более 6 — 10 мес.
Для приготовления питательной среды МППГГА с красками к 100 см3охлажденного до темпера
туры 50 °С — 60 °С агара с соблюдением правил асептики добавляют 2 см3исходного раствора крас
ки для получения разведения 1:50000.
Питательную среду с краской разливают пипеткой по 20 — 25 см3 в чашки Петри и подсушивают
при комнатной температуре, не открывая чашки.
Срок хранения среды с красками в холодильнике при температуре от 2 °С до 8 °С — не более
10 — 15сут.
Обесцвеченные среды для тестирования не используют.
9.3.2.2 Проведение исследования
Взвесь бруцелл готовят из двухсуточной агаровой культуры. Посевы испытуемых культур
проводят бактериологической петлей из взвеси,содержащей 2 млрд/см3 микробных клеток, на
среду МППГГА с фуксином и тионином по 9.4.2.1 и на среду МППГГА без добавления красок (кон
троль). Одну петлю взвеси засевают путем нанесения пяти отдельных штрихов на поверхность агара.
На одну чашку Петри можно одновременно засевать четыре—шесть культур, предварительно разде
лив чашку Петри на четыре—шесть секторов.
Чашки с посевами переворачивают агаром вверх и выдерживают в термостате при температуре
37 °С — 38 °С в течение 3 сут.
9.3.2.3 Учет результатов
Учет результатов проводят через трое суток инкубации по следующей схеме:
- выраженный рост культуры во всех штрихах «♦+♦+»;
- выраженный рост в первых двух и более слабый в последующих штрихах «♦+♦»;
- умеренно выраженный рост в первых двух штрихах и слабый или отсутствие роста в осталь
ных штрихах «++»:
- слабый сплошной рост или отдельные колонии в первых двух штрихах «+».
9.3.3 Реакция агглютинации с монороцепторными А и М бруцеллезными сыворотками
9.3.3.1 Проведение испытания
Для проведения РА монорецепторные А и М бруцеллезные сыворотки разводят последова
тельно двукратно, получая соотношения 1:5,1:10, 1:20. 1:40 и 1:80 в объеме 0.5 см3. В качестве анти
гена используют взвесь двухсуточной агаровой культуры бруцелл в физиологическом растворе в
концентрации 2 млрд/см3 микробных клеток по оптическому стандарту мутности.
Антиген добавляют по 0.5 см3во все пробирки таким образом, разведение сыворотки удваива
ется (1:10.1:20 и т. д.).
Пробирки со смесью сыворотки и антигена выдерживают в термостате при температуре 37 °С в
течение 16 —18 ч. а затем в течение 1 ч при комнатной температуре.
9.3.3.2 Учет результатов
Положительная РА в разведении сыворотки 1:20 с оценкой не менее чем на два креста позво
ляет отнести культуру бруцеллы к виду B.aborlus или В. melitensis.
9.3.4 Определение чувствительности культур бруцелл к фагу ТЬ
Бруцеллезный фаг ТЬ избирательно лизирует бруцеллы вида В. abortus, находящиеся в
S-форме.
9.3.4.1 Подготовка к исследованию
Для определения чувствительности бруцелл к лизису бактериофагом используют два его раз
ведения: 1 ‘ 105корлускул/см3 и 1 ’ 109 корпускуп/см3. Разведения бактериофага готовят путем деся
тикратных разведений исходной культуры в физиологическом растворе.
9.3.4.2 Проведение исследования
Для исследования используют МППГГА в чашках Петри с концентрацией агара 1.5 % —1.8 %.
Среду и взвесь двухсуточной агаровой культуры бруцелл в физиологическом растворе по 9.1.1 с
концентрацией 1 млрд/см’ микробных клеток по ОСО мутности на 10Е подсушивают при комнатной
температуре в течение 18 — 20 ч.
13