ГОСТ 33505—2015
4.4 Серологические отборочные анализы проводят твердофазным ИФА в модификациях
DAS-ELISA и TAS-ELISA с универсальными моноклональными или поликлональными антителами, по
зволяющими выявлять все штаммы потивируса шарки слив.
Положительный результат в серологическом отборочном анализе проверяют в подтверждающем
молекулярном анализе с универсальными праймерами и зондами на основе ПЦР в различных моди
фикациях или методом гибридизации нуклеиновых кислот, позволяющими выявлять все штаммы по
тивируса шарки слив.
Образец считают зараженным потивирусом шарки слив при наличии положительных результатов
в обоих анализах.
4.5 В случае использования в качестве отборочных анализов молекулярных методов положитель
ный результат проверяют в подтверждающем серологическом анализе, который проводят твердофаз
ным ИФА в модификациях DAS-ELISAn TAS-ELISA с универсальными моноклональными или поликло
нальными антителами, позволяющими выявлять все штаммы потивируса шарки слив.
Образец считают зараженным потивирусом шарки слив при наличии положительных результатов
в обоих анализах.
4.6 При выявлении потивируса шарки слив отборочными и подтверждающими анализами реко
мендуется проводить идентификацию штамма вируса твердофазным ИФА в модификации TAS-ELISA со
штаммспецифичными моноклональными антителами или молекулярными методами с праймерами и
зондами, специфичными к штаммам потивируса шарки слив.
4.7 При первичном обнаружении потивируса шарки слив рекомендуется провести секвенирование
гена белка оболочки для сравнения с сиквенсами изолятов потивируса шарки слив в базах данных ге
нетических последовательностей.
4.8 Исходный образец плодов или листьев растений с этикетками, образцы РНК и экстракты сока,
полученные из образцов растений, хранят в пробирках при температуре минус 80 °С не менее 12 мес;
продукты амплификации ПЦР — при температуре минус 20 °С не менее 12 мес.
5 Общие требования
5.1 Требования безопасности
При выполнении исследования необходимо соблюдать требования техники безопасности при ра
боте с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.
Исследования проводят в перчатках и лабораторных халатах. При работе с раствором бромисто
го этидия используют резиновые перчатки.
Помещение, в котором проводят исследования, должно быть оборудовано общей приточно-вы
тяжной вентиляцией по ГОСТ 12.4.021. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не долж но
превышать норм, установленных ГОСТ 12.1.005.
При работе с электроустановками электробезопасность должна соответствовать требованиям
ГОСТ 12.1.019. Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасно
сти по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. При работе с УФ-излучением
необходимо пользоваться защитным экраном и защитными очками.
Утилизацию зараженного растительного материала проводят автоклавированием в течение
20 мин при температуре от 121 °С до 125 °С.
5.2 Требования к лаборатории
Общие требования к лаборатории — по ГОСТ ISO/IEC 17025.
Для исключения ложноположительных результатов исследования и некорректной интерпретации
полученных результатов ПЦР-лаборатория должна включать следующий набор рабочих зон:
- приема и регистрации образцов;
- первичной обработки образцов;
- выделения ДНК/РНК;
- проведения ПЦР;
- детекции продуктов амплификации (отсутствует в случае, если детекцию продуктов ПЦР осу
ществляют по методике ПЦР в режиме реального времени).
4