ГОСТ 33505—2015
- трис (оксиметил) аминометан (Трис);
- ЭДТА;
- этидий бромистый, х. ч.;
- колбы мерные вместимостью 100, 500 и 1000 см3 по ГОСТ 1770;
- контейнеры пластиковые, вместимостью 50 см3;
- пробирки конические микроцентрифужные с крышкой типа Эппендорф вместимостью 0,2; 0,5;
от 1,5 до 2,0 см3;
- ступку фарфоровую с пестиком по ГОСТ 9147;
- перчатки одноразовые для лабораторных исследований и резиновые;
- пленку лабораторную Парафилм;
- праймеры для универсального выявления всех изолятов потивируса шарки слив:
Р1: 5’-АСС GAG ACC ACT АСА СТС СС-3’;
Р2: 5’-CAG ACT АСА GCC TCG CCA GA-3’;
3’ NCR sense: 5’-GTA GTG GTC TCG GTATCT АТС ATA-3’;
3’ NCR antisense: 5’-GTC TCT TGC АСА AGA ACT ATA ACC-3’;
- праймеры для выявления штамма PPV-D:
Р1: 5-3’ ACC GAG ACC ACT АСА СТС CC;
PD: 5-3’ CTT CAA CGA CAC CCG TAC GG;
- праймеры для выявления штамма PPV-M:
Р1: 5’-3’ ACC GAG ACC ACT АСА СТС CC;
PM: 5’-3’ CTT CAA CAA CGC CTG TGC GT;
- праймеры для выявления штамма PPV-Rec:
mD5: 5’-TAT GTC АСА ТА A AGG CGT TCT C-3’;
mM3: 5-CAT TTC CAT AAA CTC CAA AAG AC-3’;
- праймеры для выявления штамма PPV-C:
CSoC-2: 5-TAC АТС TCG АТС CTT CCT C’-3’;
HSoC-2: 5-TCC ACC ATT CCC AAA TCT G’-3’;
- праймеры для выявления штамма PPV-CR:
CR8597F: 5’-АТGATGTGACGTTAGTGGAC-3’;
CR9023R: 5’-TCGTGTGTTAGACAGGTCAAC-3’;
- праймеры для выявления штамма PPV-W:
W8328F: 5’-GCA TCA ATG GTAGAG GCATG-3;
W8711R: 5’-CAT TGA CGT TGT GCT CTG CA-3;
- халаты лабораторные.
6.6Допускается применение других средств измерений и посуды по метрологическим характе
ристикам, а также аппаратуры, реактивов и материалов по техническим характеристикам не хуже вы
шеуказанных.
7 Подготовка к исследованиям
7.1 Приготовление растворов
7.1.1 Приготовление растворов для теста на травянистых индикаторных растениях
7.1.1.1 Приготовление натрий-фосфатного буферного раствора с pH 7,3
В мерной колбе вместимостью 1000 см3 с 800 см3дистиллированной воды растворяют 8 г хлори
да натрия, 0,2 г хлорида калия, 2,9 г гидрофосфат додекагидрата натрия и 0,2 г дигидроортофосфата
калия. Доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Проверяют pH буферного раство
ра, который должен быть (7,3 ± 0,1) ед. pH.
Срок хранения натрий-фосфатного буферного раствора в колбе в холодильной камере при темпе
ратуре от 2 °С до 5 °С — не более 5 сут.
7.1.1.2 Приготовление промывочного буферного раствора
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 наливают 800 см3 натрий-фосфатного буферного раство
ра по 7.1.1.1 и добавляют 0,5 см3 твина 20. Доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.
Срок хранения промывочного буферного раствора в колбе в холодильной камере при температу
ре от 2 °С до 5 °С — не более 5 сут.
8