ГОСТ Р 52147-2003
7.3.1 Омыление и экстракция
Навеску исследуемого продукта массой 4,00—5,00 г помешают в круглодонную колбу со шли
фом вместимостью 250 см\ приливают 50 см* этилового спирта, 10 см ’ раствора гидроокиси калия
массовой долей 50
%
и добавляют 40—50 мг пирогаллола или гидрохинона (на кончике скальпеля).
Колбу соединяют с обратным холодильником, помешают в водяную баню и нагревают при
температуре (85 ± 2) *С в течение 25 мин, периодически перемешивая содержимое колбы. После
этого содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры.
Затем в колбу приливают 20—25 см1 дистиллированной воды. 50 см1 диэтилового эфира,
перемешивают, жидкую часть сливают в делительную воронку вместимостью 500 см3, сохраняя
осадок в колбе. Экстракцию витаминов диэтиловым эфиром проводят трижды по 7.2.5.
При образовании устойчивой эмульсии в делительную воронку добаатяют 20 см* этилового
спирта.
В объединенный эфирный экстракт добаатяют несколько кристаллов бугилокситолуола и
промывают его дистиллированной водой порциями по 100 см3до исчезновения розовой окраски
промывных вод по реакции с фенолфталеином. Затем экстракт переносят в круглодонную колбу,
пропуская его через бумажный фильтр со слоем безводного сернокислого натрия (30—50 г). Дели
тельную воронку и фильтрующий материал промывают 40 см3диэтилового эфира. Эфир выпаривают
досуха в водяной бане при температуре не выше 50 “С в токе азота или под вакуумом на ротационном
испарителе. Сухой остаток растворяют в 4 см3петролейного эфира.
Примечание —Допускается для экстракции применять петролейный эфир.
7.3.2 Подготовка хроматографической колонки
В нижнюю часть колонки помешают кусочек паты, затем активированную окись алюминия,
уплотняя ее постукиванием по колонке деревянной палочкой до высоты сорбента 7 см. Сверху
помешают слой безводного сернокислого натрия высотой 1см.
В колбу с тубусом вставляют резиновую пробку, через сквозное отверстие которой проходит
утонченный конец хроматографической колонки. Через колонку при вакууме, создаваемом с помо
щью водоструйного насоса, пропускают петролейный эфир до полного смачивания слоя окиси
алюминия (около 15 см3).
Промывание колонки проводят со скоростью одна капля в секунду, не допуская при этом
высыхания верха колонки и просасывания воздуха.
7.3.3 Хроматографическое разделение ретинола и а-токоферола
4см3 раствора экстракта испытуемого продукта, полученного по 7.3.1. помешают в колонку,
подготовленную по 7.3.2, не допуская высыхания верха колонки. Промывают колонку 15 см3
элюирующего раствора I. Эту фракцию отбрасывают.
а-токоферол элюируют от 15 до 25 см3раствора 11, контролируя продвижение витамина в УФ
свете (а-токоферол имеет голубоватое свечение).
Элюат количественно переносят в коническую колбу вместимостью 50 см3.
К колонке присоединяют другую колбу с тубусом и элюируют ретинол 30—35 см3раствора III,
также контролируя продвижение витамина в УФ-свете (ретинол имеет желто-зеленое свечение).
Элюат количественно переносят в коническую колбу вместимостью 50 см3 и выпаривают досуха в
водяной бане при температуре не выше 50 С в токе азота или под вакуумом.
Сухой остаток растворяют в 5—50 см3абсолютированного этилового спирта в зависимости от
предполагаемого содержания витамина Л.
7.3.4 Оптическую алотность полученного раствора ретинола измеряют на спектрофотометре
при длине волны 326 нм в кювете толщиной поглошающего свет слоя 10 мм относительно абсолю
тированного этилового спирта.
7.3.5 Проведение цветной реакции с раствором а-токоферола
Собранный и перенесенный в коническую колбу элюат а-токоферола выпаривают досуха на
водяной бане при температуре не выше 50 “С в токе азота или пол вакуумом. Остаток растворяют в
10 см3абсолютированного этилового спирта. Ориентируясь на рецептуру добавки, берут 0,2—3,5 см’
раствора и переносят в кювету толщиной поглощающего свет слоя 10 мм или в мерную пробирку
вместимостью 5 см3, добаатяют соответственно от 3,8 до 0,5 см3 абсолютированного этилового
спирта, 0,5 см3раствора о-фенантролнна и 0,5 см3раствора хлорного железа. Опытную пробу ставят
в темное место на 5 мин для развития окраски. По истечении времени измеряют оптическую
плотность испытуемого раствора на фотоэлектроколориметре при длине волны (520 ± 25) им отно
сительно абсолютированного этилового спирта.
6