ГОСТ Р 52147-2003
шлифом вместимостью 250 см’, добавляют окаю 200 мг пирогаллола или гидрохинона (на кончике
скальпеля), 30 см3этилового спирта и 5 см’ раствора гидроокиси калия массовой долей 50
%.
Колбу
соединяют с обратным холодильником и проводят омыление в водяной бане при температуре (S5
± 2) *С в течение 30 мин, охлаждают до комнатной температуры под струей водопроводной воды и
добаатяют 15 см3 дистиллированной поды. Затем содержимое колбы переносят в делительную
воронку вместимостью 250 см\ промывают колбу 20 см’ этилового спирта, который тоже переносят в
делительную воронку. Добавляют 30 см3смеси диэтилового эфира и гексана в объемном соотно
шении 1:1, полученную смесь тщательно перемешивают. После расслаивания нижний слой (волно-
спиртовый) сливают в коническую колбу, а гексано-эфирный оставляют в делительной воронке. Эту
операцию экстракции ретинола гексано-эфирной смесью из водно-спиртового слоя в конической
колбе проводят еше дважды по 7.2.5. каждый раз сливая в делительную воронку гексано-эфирный
слой. Объединенный экстракт вделительной воронке промывают дистиллированной водой порция
ми по 30 см’ до исчезновения розовой окраски промывных вод по реакции с раствором фенолфта
леина. Промытый экстракт переносят в коническую колбу вместимостью 250 см3, пропуская его
через бумажный фильтр и слой безводного сернокислого натрия (40—50 г). Делительную воронку и
фильтрующий материал промывают дважды порциями гексано-эфирной смеси (20—30 см3).
Экстракт выпаривают досуха в водяной бане при температуре не выше 60 "С в токе азота или под
вакуумом на ротационном испарителе. Сухой остаток растворяют в гексане, количественно перено
сят в мерную колбу вместимостью 50 см3, добаатяют 100 мг бутилокситолуола. перемешивают, объем
раствора в колбе доводят гексаном до метки и снова тщательно перемешивают.
8.2.5.2Приготовление градуировочных растворов ретинола массовой концентрации 20, 100 и
500 МЕ/см3
В три мерные колбы вместимостью по 50 см’ помешают 1: 5 и 25 см3 раствора ретинола
массовой концентрации 1000 МЕ/см3, доводят объемы растворов в колбах до метки гексаном и
тщательно перемешивают.
Оптическую плотность растворов измеряют на спектрофотометре при длине полны 326 нм в
кювете толщиной поглощающего спет слоя 1см относительно гексана.
Массовую концентрацию репшата в растворе СА, МЕ/см’ вычисляют по формуле
(4)
£}£, 100-0,3
где
D
—оптическая плотность раствора ретинола;
106—коэффициент пересчета граммов в микрограммы;
£ J* —оптическая плотность раствора ретинола в гексане массовой концентрации 1г в 100 см3
при длине волны 326 нм и толщине поглощающего свет слоя 1см (для ретинола £} *, = 1830);
0,3 —коэффициент пересчета массы ретинола в ME, мкг/.МЕ.
8.2.6 Приготовление растворов а-токоферола
8.2.6.1 Приготовление раствора а-токоферола массовой концентрации 1000 мкг/см3
Навеску витамина Е массой 0.1120 г в расчете на содержание чистого вещества помешают в
круглодонную колбу со шлифом вместимостью 250 см3 и проводят омыление, экстракцию и обез
воживание по 7.2.5.
После выпаривания сухой остаток растворяют в 100 см3гексана.
8.2.6.2 Приготовление градуировочных растворов а-токоферола массовой концентрации 20,
100 и 500 мкг/см’
В три мерные колбы вместимостью 50 см3 помещают 1; 5 и 25 см3 раствора а-токоферола
массовой концентрации 1000 мкг/см3, доводят объем раствора в колбах до метки гексаном и
тщательно перемешивают.
Массовые концентрации а-токоферала в растворах проверяют спектрофотометрическн по 7.2.6
и вычисляют по формуле 1.
8.2.7 Приготовление растворов шламина D
8.2.7.1 Приготовление раствора витамина D массовой концентрации 20 000 МЕ/см3
Навеску кристаллического эргокатьцнферола (холекатьциферола) массой 0.100 г помещают в
мерную калбу вместимостью 200см3, растворяют в гексане, объем раствора в колбе доводятдо метки
гексаном и тщательно перемешивают.
8.2.7.2 Приготовление грату нровочных растворов витамина D массовой концентрации 50 и
100 МЕ/см’
9