ГОСТ Р 52147-2003
Объединенные эфирные экстракты промывают дистиллированной водой порциями по 30 см3
до исчезновения розовой окраски промывных вод по реакции с фенолфталеином. Промытый
экстракт переносят в коническую колбу вместимостью 250 см3, пропуская его через бумажный
фильтр и стой безводного сернокислого натрия (10—15 г). После окончания фильтрации сернокис
лый натрий три раза промывают порциями (по 20—30 см3) диэтилового эфира. Эфир отгоняют в
водяной бане при температуре не выше 50 ’С втоке азота или под вакуумом, используя водоструйный
насос или роторный испаритель.
К сухому остатку приливают 10—15 см3абсолютированного этилового спирта, количественно
переносят раствор в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят объем в колбе до метки этим же
спиртом и тщательно перемешивают.
7.2.6 Приготовление раствора а-токоферола массовой концентрации 20 мкг/см1
I см3 раствора а-токоферола массовой концентрации 1 мг/см3 переносят в мерную колбу
вместимостью 50 см3, доводят объем в колбе абсолютированным спиртом до метки и тщательно
перемешивают.
В полученном растпоре проверяют массовую концентрацию а-токоферола и его чистоту,
снимая спектр в пределах 260—310 нм на спектрофотометре в кювете толщиной поглощающего свет
слоя 1см относительно абсолютированного этилового спирта. Чистый «-токоферол имеет симмет
ричный пик максимумом поглощения при длине волны 292 нм.
Массовую концентрацию а-токоферола в растворе
С\,
мкг/см3. вычисляют по формуле
Q
О
КУ
/г;* то
(О
где
D —
оптическая плотность раствора при длине волны 292 нм;
106 —коэффициент пересчета граммов в микрограммы;
£ j—оптическая плотность раствора «-токоферола в абсолютированном этиловом спирте массо
вой концентрации 1г в 100 см3при длине волны 292 нм и толщине поглощающего свет слоя
1см (для а-токоферола £ |= 75).
7.2.7 Построение градуировочного графикадля определения токоферола-ацетата (витамина Е)
В пять мерных пробирок вместимостью по 5 см3приливают 0.5; 1,0; 2,0; 3,0 и 4.0 см3раствора
а-токоферола массовой концентрации 20 мкг/см3. В первые четыре пробирки добавляют 3,5; 3,0;
2.0 и 1,0см3абсолютированного этилового спирта. Затем в пробирки добавляют по 0,5 см3раствора
о-фенантролина и по 0.5 см’ раствора хлорного железа, перемешивают. Ставят опытную пробу в
темное место на 5 мин для развития окраски. По истечении времени измеряют оптические плотности
испытуемых растворов в порядке возрастания их концентрации нафотоэлектроколориметре в кювете
толщиной поглощающего свет слоя 10 мм при длине волны (520 ± 25) нм относительно абсолюти
рованного этилового спирта. Одновременно проводят контрольное испытание на реактивы без
внесения а-токоферола.
По полученным данным строят градуировочный график, откладывая на оси ординат значения
разности оптической плотности испытуемых растворов и контрольного раствора, на оси абсцисс —
содержание а-токоферола, мкг/5 см3(10, 20. 40. 60 и 80 мкг/5 см3)
7.2.8 Приготовление элюирующих растворов
7.2.8.1 Приготовление раствора I
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 6 см3диэтилового эфира и объем жидкости в
колбе доводят до метки петролейным эфиром, перемешивают.
7.2.8.2 Приготовление раствора II
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 12 см’ диэтилового эфира и объем жидкости в
колбе доводят до метки петролейным эфиром, перемешивают.
7.2.8.3 Приготовление раствора III
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 30 см3диэтилового эфира и объем жидкости в
колбе доводят до метки петролейным эфиром, перемешивают.
7.3Проведение испытаний
Из-за высокой чувствительности витаминов к ультрафиолетовому свету и воздуху все проце
дуры. связанные с анализом, следует завершить в течение одного рабочего дня, избегая воздействия
натурального и интенсивного флуоресцентного света.
5