ГОСТ Р 52147-2003
В дне мерные колбы вместимостью 200 см3 помешают 0.5 и 1,0 см5 раствора витамина D
массовой концентрации 20 000 ME/см’. Объемы растворов в колбах доводят до метки гексаном и
тщательно перемешивают.
Оптическую плотность растворов измеряют на спектрофотометре при длине волны 265 нм в
кювете толщиной поглощающего свет слоя 1см относительно гексана.
Массовую концентрацию витамина D в растворе CD, МЕ/см3, вычисляют по формуле
Г0
Н*
Сп = -------------------,
/сч
(Э)
£|см 100 0.025
где
D
—оптическая плотность раствора витамина D;
10*’—коэффициент пересчета граммов в микрограммы;
£ | 2, — оптическая плотность раствора витамина D в гексане массовой концентрации 1г в 100 см’
раствора при длине волны 265 нм и толщине поглощающего свет слоя 1см (для витамина
D> £!= 465; дтя витамина Dj £} *, = 500);
0,025 —коэффициент пересчета массы витамина D в ME, мкг/МЕ.
8.2.8В растворы витаминов добавляют несколько кристаллов 2.6-ди-трет-бутил-п-крезола
(бутнолокситолуола) и хранят в холодильнике не более 1 мес.
8.3 Проведение испытания
8.3.1 Омыление и экстракция
Навеску исследуемого продукта массой 5,00—10.00 г помещают в круглодонную колбу со
шлифом вместимостью 250 см5, добавляют 100—150 мг пирогаллола или гидрохинона (на кончике
скальпеля) и соответственно 50—70 см’ этилового спирта и 10—15 см5 раствора гидроокиси калия
массовой долей 50
%.
Дальнейшую процедуру омыления и экстракции проводят по 7.3.1. Сухой
остаток витаминов растворяют в 4 см3гексана.
Примечание—Допускаетсядля экстракции применять петролейный эфир.
8.3.2 Очистка раствора, полученного по 8.3.1, на колонке с окисью алюминия
8.3.2.1 Подготовка хроматографической колонки —по 7.3.2.
8.3.2.2 Элюирование витамина D
В колонку (8.3.2.1), не допуская высыхания верха колонки, вносят 4 см3 раствора (8.3.1) и
промывают ее 20 см’ петролейного эфира и 4 см3 смеси петролейпого и диэтнлового эфира в
объемном соотношении 1:1. Эту фракцию отбрасывают.
Витамин D элюиру ют 20см3 смеси петролейпого и диэтнлового эфира в объемном соотноше
нии 1:1. Элюат количественно переносят в коническую колбу вместимостью 50 см3 и выпаривают
досуха в водяной бане под током азота при температуре (60 ± 2) "С.
Сухой остаток растворяют в 1 см3гексана.
Полученный раствор (далее испытуемый раствор) используют дтя ВЭЖХ.
8.3.3 Подготовка жидкостного хроматографа к работе
Подготовку прибора осуществляют в соответствии с инструкцией по эксплуатации.
Перед началом работы колонку промывают элюентом при скорости его подачи 100—
200 мкдм’/мин в течение 5—10 мин.
8.3.4 Выполнение измерений на хроматографе *Милихром»
8.3.4.1 Условия проведения измерений
Измерения проводят в следующих условиях:
а) разделение компонентов проводят на колонке размером 64 (80, 120) х 2 мм;
б) сорбент —Силосорб 600;
в) элюент —гексан-изопропиловый спирт в объемном соотношении 98.5:1,5 (98:2);
г) рабочие длины воли УФ-детектора —264. 292 и 324 нм (соответственно дтя витаминов
D, Е, Л);
д) скорость хиоирования — 150 —200 мкдм’/мин;
е) объем анализируемого раствора — 10—40 мкд.м’ для витамина D и 4—5 мкдм3дтя вита
минов А, Е.
8.3.4.2 Проведение измерений испытуемого раствора
Для измерений используют метод внешнего стандарта. В колонку хроматографа последователь
но вводят равные объемы испытуемого и градуировочного растворов.
10