ГОСТ Р 52147-2003
По полученному результату анализа и значению относительной погрешности (таблица 1)
рассчитывают абсолютную погрешность Д по формуле
Д = 0,0ISA".
Результат анализа представляют в виде
(X
± Д) МЕ/кг ИЛИ
(X ±
Д) мг/кг при
Р
= 0,95.
8Определение содержания ретинола-ацетата (витамина А),
эргокальциферола (холекальциферола) (витамина D),
токоферола-ацетата (витамина Е) методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)
Сущность метода заключается в омылении образца водно-спиртовым раствором гидроокиси
калия, экстракции витаминов диэтиловым эфиром с последующим определением витаминов на
жидкостном хроматографе.
При содержании витамина D в испытуемом продукте менее 10 МЕ/r перед проведением
высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) необходима очистка экстракта на колонке
с окисью алюминия по 8.3.2. Анализ проводят из отдельно взятой навески массой 10 г.
8.1 Аппаратура, материалы и реактивы
Аппаратура, материалы и реактивы по 7.1 со следующим дополнением.
Хроматограф жидкостный «Мнлихром* с УФ-детектором со спектральным диапазоном 190—
360 нм, обеспечивающий одновременное измерение на не менее 3 длинах волн с уровнем шумов не
более 10~4единиц оптической плотности (е. о. п.).
Колонка аналитическая хроматографическая для ВЭЖХ. размером 80 (64. 120) х 2 мм. запол
ненная сорбентом Силасорб 600 (размер частиц 5 мкм) с эффективностью не ниже 5000 теорети
ческих тарелок.
Прибор для перегонки при атмосферном давлении |10|.
Ретинол-ацетат (витамин А) фармакопейный |И |.
Эргокальниферол кристаллический (витамин D, ) 112] или холекальннферол кристаллический
(витамин D3) 113).
Спирт изопропиловый |14|.
Гексан |15|.
/Алюминия окись для хроматографии |16|.
2,6-Ди-трет-бутил-п-крезол (бутиолокситолуол) |17|.
II р и м с чайке —Допускаетсяприменениедругихтипов хроматографов, сорбентовисоответствующих
им растворителей, обеспечивающих эффективное разделение исследуемых компонентов. При этом условия
разделения витаминов подбираются самостоятельно каждым пользователем.
8.2 Подготовка к испытанию
8.2.1 Приготовление элюирующего раствора
Готовят смесь гексана с изопропиловым спиртом в объемном соотношении 98,5:1,5 (98:2)
8.2.2 Очистка изопропилового спирта
Изопропиловый спирт перегоняют над гидроокисью калия тын натрия (К) г гидроокиси тре
буется для перегонки 1дм3спирта).
Реактив должен иметь оптическую плотность не более 0,1 е. о. п. при
к
= 320 — 350 нм
относительно дистиллированной воды.
8.2.3 Приготовление окиси алюминия
Реактив прокаливают в муфельной печи при температуре (750± 10) *С втечение 4 ч, охлаждают
до комнатной температуры в эксикаторе. К 91 г реактива добавляют 9 см3дистиллированной воды,
тщательно перемешивают и хранят в посуде с притертой пробкой.
Годен для использования после отстаивания в течение 3 ч.
8.2.4 Приготовление безводного сернокислого натрия по 7.2.3
8.2.5 Приготовление растворов ретинола
8.2.5.1 Приготовление раствора ретинола массовой концентрации 1000 МЕ/см5.
Навеску ретипола-анетата. соответствующую 50 000 ME препарата, помещают в колбу со