Приложение Ж
(справочное)
ГОСТ Р 51870—2014
Биолюминесцентный метод определения общей биологической
чистоты поверхностей
Метод распространяется на материалы поверхностей и позволяет определить общую биологи
ческую чистоту по количеству аденозин-5’-трифосфорной кислоты динатриевой соли (АТФ).
Ж.1 Аппаратура, материалы, реактивы
Л
юминометр.
Микрокюветы из полистирола.
Тампоны ватные, стерильные.
Пробирки стерильные объемом 1,5 мл (типа «эппендорф»).
Дозатор автоматический постоянного объема 0.02 мл.
Дозатор автоматический постоянного объема 0,10 мл.
Реактив N° 1- АТФ-реагент.
Реактив № 2 - раствор для реконструкции АТФ-реагента.
Реактив N° 3 - АТФ-контроль.
Реактив N° 4 - раствор реагента для разрушения клеток.
Реактив N°5 - раствор для смачивания тампонов.
Ж.2 Подготовка к испытанию
Ж.2.1 Во флакон с реактивом N° 1 вносят 4 мл раствора из флакона с реактивом № 2, выдержи
вают 30 мин перед использованием. Полученный раствор АТФ-реагента хранят при комнатной тем
пературе в точение рабочего дня. а при 4 ’С - в течение двух-трех дней.
Ж.2.2 Во флакон с реактивом № 3 вносят 1 мл раствора из флакона с реактивом № 5, переме
шивают. Раствор АТФ-контроля следует использовать в течение 2-3 ч.
Ж.2.3 Пробирки (типа «эппендорф») нумеруют по количеству анализируемых поверхностей,
устанавливают в штатив, вносят в них по 0.2 мл реактива N° 4 и добавляют одну пробирку для АТФ-
контроля.
Ж.2.4 Производят калибровку АТФ-реагента по АТФ-контролю. для чего кончик тампона погру
жают в раствор с АТФ-контролем и выдерживают течение 20 сек. Вынимают увлажненный тампон из
раствора и помещают в пробирку с 0.2 мл раствора для разрушения бактериальных клеток. Извлека ют
тампон из пробирки, отжав излишек жидкости о стенку.
Ж.2.5 Помещают микрокювету с помощью пинцета в кюветное отделение люминометра.
С помощью автоматических дозаторов вносят в нее:
- 0.02 мл раствора АТФ-контроля;
- 0,10 мл раствора АТФ-реагента.
Быстро перемешивают содержимое микрокюветы, прокачав его 2-3 раза через наконечник доза
тора. и измеряют биолюминесцентный сигнал на люмииометре.
Ж.2.6 Повторяют измерения и находят среднее значение биолюминесцентного сигнала для
АТФ-контроля (/№MTFJ.
Ж.З Проведение испытания
Ж.3.1 Для каждого образца поверхности используют новый стерильный ватный тампон. Погру
жают кончик тампона в реактив № 5 и выдерживают в течение 20 с.
Ж.3.2 Влажным тампоном тщательно протирают исследуемую поверхность, перемещая тампон
сначала - по горизонтали, затем - по вертикали, и в конце - по диагонали. Площадь поверхности вы
бирают потребители.
Ж.3.3 Помещают тампон в пробирку с 0.2 мл раствора для разрушения бактериальных клеток,
выдерживают в течение 1-2 мин. периодически вращая. Извлекают тампон из пробирки, отжав из
лишек жидкости о стенку, и закрывают пробирку.
Ж.3.4 Помещают микрокювету с помощью пинцета в кюветное отделение люминометра. С по
мощью автоматических дозаторов вносят в нее:
- 0.02 мл раствора АТФ-контроля;
- 0,10 мл раствора АТФ-реагента.
Быстро перемешивают содержимое микрокюветы, прокачав его два-три раза через наконечник
дозатора, и измеряют биолюминесцентный сигнал на люмииометре.
Ж.3.5 Повторяют операции с использованием второй микроюоветы. Находят среднее значение
биолюминесцентного сигнала для исследуемого образца (lo6p).
29