ГОСТ 32383—2013
В начале исследования разница в массе подопытных животных должна быть минимальна и не
превышать ± 20 % от средней массы всех животных, задействованных в исследовании, отдельно
каждого пола. Животные должны быть случайным образом распределены на контрольную и тестовую
группы. После распределения заметной разницы в средней массе между группами каждого пола быть не
должно. Если же она имеется, следует, по возможности, повторить распределение. Каждое
животное должно быть помечено индивидуальным идентификационным номером, и этот номер
следует нанести на перманентной основе, с помощью татуировки, вживления микрочипа или другим
подходящим способом.
4.2 Основное испытание
4.2.1 Количество и пол животных
Должны использоваться животные обоих полов. Следует использовать такое количество
животных, чтобы по окончании исследования в кахщой группе оставалось достаточное их количество
для биологического и статистического анализов. Как правило, грызуны - минимум 20 животных, а
негрызуны, как минимум, по 4 животных в каждой группе каждого пола для каждого уровня
концентрации. В исследованиях, где задействованы мыши, может возникнуть необходимость в
дополнительных животных в каждой группе для проведения всех необходимых гематологических
анализов. В зависимости от цели исследования, можно увеличить статистическую значимость
основных показателей, распределив неравномерно животных по концентрациям.
4.2.2Резервдляпромежуточныхумерщвлений,вспомогательныегруппыи
индикаторные животные
При исследовании можно сделать резерв для промежуточных умерщвлений, например, в шесть
месяцев, для получения данных о развитии токсических изменений и данных о механизме
воздействия, если это научно обосновано. Также можно задействовать вспомогательные группы для
отслеживания обратимости любых токсических изменений, вызванных химическими веществами при
исследовании. Как правило, их распределяют на группу с самым высоким уровнем концентрации и
контрольную группу. Если запланировано промежуточное умерщвление, количество животных,
включенных в план исследования, должно быть увеличено на число животных, которых планируется
умертвить до завершения исследования. Этим животным следует провести такое же обследование
(включая массу тела, потребление воды и пищи, гематологические и клинические биохимические
показатели, выявление патологий), как и животным в стадии хронической токсичности основного
исследования. Можно также сделать резерв (в группах промежуточного умерщвления) для
измерений, ограниченных особыми, ключевыми показателями, такими как нейротоксичность или
иммунотоксичность.
4.2.3 Концентрация
Следует использовать как минимум три уровня концентрации и параллельный контроль, за
исключением тех случаев, когда проводится исследование с максимально возможной концентрацией.
Чаще всего при выборе уровней концентрации основываются на результатах краткосрочных
исследований повторной концентрации или исследованиях по обнаружению диапазона концентраций.
Необходимо принимать во внимание любые существующие токсикологические и токсикокинетические
данные по тестируемому или родственным ему веществам.
Если нет ограничений по физико-химической природе или биологическому воздействию
исследуемого вещества, должна быть выбрана самая высокая концентрация для определения
основных органов-мишеней и токсичных эффектов воздействия. Однако следует избегать страданий,
тяжелой токсичности, болей или смерти. Самый высокий уровень концентрации следует выбрать для
получения признаков интоксикации, как. например, о токсичности свидетельствуют изменения уровня
сывороточного фермента или невозможность набрать массу (примерно 10 %).
Однако в зависимости от целей исследования может быть выбрана наивысшая концентрация
ниже, чем концентрация, подтверждающая наличие токсичности, например, если концентрация
вызывает побочное действие, которое, тем не менее, слабо отражается на продолжительности жизни
или массе тела.
Разница между концентрациями должна быть направлена на определение зависимости
«концентрация-ответ» и установление наивысшего уровня концентрации, при которой не
наблюдается вредный эффект воздействия (NOAEL) или других предполагаемых результатов
исследования, например. ВМС при самом низком уровне концентрации. Условия, которые должны
быть приняты во внимание при установлении нижних концентраций, включают: предполагаемый
наклон кривой зависимости «концентрация-ответ», концентрации, при которых могут происходить
важные изменения в метаболизме или вид токсического действия, когда предполагается пороговая
величина, или когда предполагается исходная точка для экстраполяции низкой концентрации.
Избранная разница в уровне концентрации зависит от параметров тестируемого вещества и не
может быть прописана в этом стандарте. Но диапазон от двух до четырех зачастую оптимален для
3