ГОСТ 32645-2014
5 Процедура испытания
5.1 Количество и пол животных
При проведении самостоятельного испытания в каждой группе дозирования и контрольной
группе необходимо использовать, как минимум, по 20 животных (10 женских и 10 мужских особей) для
проведения подробного клинического обследования и функциональных тестов. По крайней мере. 5
мужских и 5 женских особей, отобранных из данных 10 мужских и 10 женских особей, подвергают
перфузии in situ и используют для подробного нейрогистопатологического исследования в конце
испытания. В случаях, когда только ограниченное число животных из данной группы дозирования
наблюдают на наличие признаков нейротоксического действия, следует рассмотреть вопрос о
включении данных животных группы для перфузии. Когда исследование проводится в сочетании с
испытанием токсичности повторной дозы, необходимо использовать достаточное количество
животных для достижения целей обоих исследований. Минимальное количество животных в группе
для различных комбинаций исследований приведено в таблице 1. Если планируется проводить
промежуточные умерщвления животных, наблюдения обратимости нейротоксических эффектов в
группах восстановления или сохранения / появления отложенных эффектов после воздействия или
иные дополнительные наблюдения, количество животных должно быть увеличено для возможности
проведения соответствующих наблюдений и гистопатологического обследования.
5.2 Исследуемые и контрольные группы
Необходимо использовать, как минимум, три группы дозирования и контрольную группу, но если
на основании оценки имеющихся данных, появление какой-либо реакции при повторной дозе 1000 мг
/ кг массы тела / сутки не ожидается, может быть проведено тестирование с использованием
предельной дозы. Если соответствующие данные не доступны, проводится исследование по выбору
диапазона доз. которые будут использоваться в основном испытании. За исключением
введении исследуемого вещества, с животными из контрольной группы следует обращаться
также, как с животными из экспериментальных групп. Если для введения исследуемого вещества
используется растворитель, контрольная группа должна получать его в максимальном используемом
объеме.
5.3 Проверка достоверности тестирования
Лаборатория, проводящая испытание, должна представить данные,подтверждающие
возможность проводить подобные исследования и оценивать чувствительность используемых
процедур. Такие данные должны свидетельствовать о возможности выявления и. при необходимости,
количественной оценки изменений в различных объектах исследования испытания, рекомендуемых
для наблюдения, таких как автономные признаки, сенсорные реакции, сила сцепления конечностей и
двигательная активность.
Информация о химических веществах, которые вызывают различные виды нейротоксических
реакций и могут использоваться в качестве положительных контрольных веществ, представлена в
документах по ссылкам 9-16. Данные предыдущих исследований могут быть использованы, если
основные аспекты экспериментальных процедур остаются неизменными. Рекомендуется проводить
периодическоеобновлениеинформациипредыдущихисследований.Новыеданные,
подтверждающие чувствительность экспериментальных процедур, должны разрабатываться, когда
некоторые основные элементы проведения испытания или процедуры были изменены испытательной
лабораторией.
5.4 Выбор дозы
Уровни доз должны подбираться с учетом любых полученных ранее данных о токсичности и
кинетических данных для исследуемого вещества или родственных соединений. Максимальный
уровень дозы должен быть выбран с целью индуцирования нейротоксического действия или
очевидного соматического токсического эффекта. Таким образом, убывающая последовательность
доз должна быть выбрана таким образом, чтобы продемонстрировать любой эффект, зависимый от
дозы, и при наименьшей дозе - уровень воздействия, при котором не наблюдается никаких
неблагоприятных эффектов (NOAEL). В общем случае, уровень дозы должен быть установлен таким
образом, чтобы основное токсическое воздействие на нервную систему можно было отличить от
признаков, относящихся к соматической токсичности. Наиболее оптимальными являются двух- и
трехкратные интервалы, и добавление четвертой тестовой группы часто предпочтительнее
использования значительных интервалов между уровнями доз (например, более чем десятикратных). В
случае, когда существует обоснованная оценка воздействия на человека, ее следует также
принимать во внимание.
5.5 Исследование предельной дозы
Если исследование с одним уровнем дозы не менее 1000 мг/кг массы тела/сутки с
использованием описанных процедур не приводит к появлению видимого нейротоксического
действия и если, исходя из данных для структурно родственных веществ, появление признаков 4