ГОСТ 32808—2014
7.10.3 Обработка результатов
7.10.3.1 Выживаемость бруцелл при выпуске вакцины X,. %. рассчитывают по формуле
1К
(4)
где X - количество живых бруцелл при выпуске вакцины, рассчитанное по формуле (3). млрд/см3;
К - концентрация бруцелл в вакцине, рассчитанная по формуле (2). млрд/ см3.
7.10.3.2 Выживаемость бруцелл в конце срока годности (и в процессе хранения) вакцины Х2. %.
рассчитывают по формуле
X
*а «
У -100
(5)
гдеУ - количество живых бруцелл в конце срока годности (и в процессе хранения) вакцины, рассчи
танное по формуле (3). млрд/см3;
X - количество живых бруцелл при выпуске вакцины, рассчитанное по формуле (3). млрд/см3.
7.11 Определение безвредности
7.11.1 Общие принципы определения безвредности - по ГОСТ 31926.
7.11.2 Подготовка к испытанию
Сухую форму вакцины регидратируют по 7.3.1.
7.11.3 Проведение испытания
Безвредность каждой серии живых и инактивированных вакцин проверяют на десяти белых
мышах и пяти морских свинках.
Регидратированную по 7.3.1 живую вакцину из трех флаконов смешивают в равных объемах в
одном стерильном флаконе и разводят физиологическим раствором или разбавителем или дистил
лированной водой из расчета 1 млрд/см3микробных клеток по стандарту мутности. Вакцину пере
мешивают до получения гомогенной взвеси и вводят подкожно: мышам в область спины возле корня
хвоста в объеме 0,25 см3, морским свинкам в область паха в объеме 1 см3.
Инактивированную вакцину из трех флаконов переносят стерильной пипеткой по 10 см3в сте
рильный стеклянный флакон. Смесь вакцины перемешивают и вводят подкожно белым мышам в об
ласть спины возле корня хвоста в объеме 0.2 см3 и морским свинкам в область паха в объеме 0.5 см3.
Наблюдение за животными ведут в течение 10 сут.
7.11.4 Обработка результатов
Вакцина не должна вызывать гибели белых мышей в течение 10 сут. морских свинок - в тече
ние 20 - 25 сут. У морских свинок в месте введения вакцины допускается формирование умеренно
выраженной припухлости.
После эвтаназии через 20 - 25 сут у морских свинок не должно быть видимых патологических
изменений в месте введения вакцины (разлитое геморрагическое воспаление подкожной клетчатки,
мышечной ткани, некроз мышц, абсцессы) и (или) в лимфатических узлах и внутренних органах (очаги
некроза в виде серовато-матовых точечных узелков, мелкие абсцессы).
7.12 Определение агглютиногенности
7.12.1 Агглютиногенные свойства живых и инактивированных вакцин устанавливают на морских
свинках, использованных для определения безвредности.
7.12.2 Подготовка к испытанию
Кровь у морских свинок берут из сердца перед эвтаназией через 20 - 25 сут после введения вакци
ны. Для получения сыворотки кровь выдерживают в термостате при температуре 37 °С — 38 °С в те
чение 30 мин. затем обводят стальной спицей по стенке пробирки и выдерживают в холодильнике при
температуре 2 °С- 8°С в течение 18-20 ч. После извлечения пробирок из холодильника сыворотку
крови осторожно сливают в чистые сухие пробирки. При необходимости, полученную сыворотку крови
центрифугируют при 2500-3000 об/мин в течение 10 мин.
7.12.3 Проведение испытания
Сыворотку крови исследуют в РА с антигеном бруцеллезным единым для РА. РСК и РДСК (S-
форма бруцелл).
Сыворотку крови морских свинок после введения живых агглютиногениых вакцин (S-форма
бруцелл) исследуют в разведениях 1:50, 1:100. 1:200 и 1:400. а после введения живых слабоагглюти-
ногенных (SR- форма бруцелл), неагглютиногенных и инактивированных вакцин (Г?-форма бруцелл) -в
разведениях 1:10. 1:20. 1:40 и 1:80. Количество агглютининов в сыворотке крови соответствует ее
10