ГОСТ 32808—2014
7.9.4 Обработка результатов
Количество колоний бруцелл в S. R или S/7-форме К, %, рассчитывают по формуле
п
(D
гдеX - сумма колоний бруцелл во всех чашках в S. R или Sft-форме;
100 - коэффициент пересчета в проценты:
п - общее количество колоний бруцелл во всех чашках.
7.10 Определение выживаемости бруцелл
7.10.1 Подготовка к испытанию
7.10.1.1 Получение вакцины в разведении 1:10
Вакцину из трех флаконов (ампул) регидратируют по 7.3.1. Содержимое всех трех флаконов
(ампул) переносят во флакон с разбавителем или дистиллированной водой, или физиологическим
раствором, предварительно внесенным с учетом объема вакцины во флаконах (ампулах) для полу
чения разведения вакцины 1:10. который затем помещают в холодильник при температуре 4 °С - 8 °С
на 30 мин.
7.10.1.2 Определение концентрации бруцелл в вакцине
Вакцину, полученную по 7.10.1.1. в объеме 0.2
cmj вносят в
пробирку такого же диаметра, как и
оптический стандарт мутности на 10 ЕД и разводят физиологическим раствором до точного соответст
вия стандарту мутности, что будет соответствовать концентрации 1.7 или 2.0 млрд микробных клеток в 1
см3для культур бруцелл. выращенных на твердой питательной среде, и для культур бруцелл. выра
щенных на жидкой питательной среде, соответственно.
Концентрацию бруцелл в вакцине К. млрд/см3, рассчитывают по формуле
где А - объем вакцины в разведении 1:10. равный 0,2 см3:
В - объем физиологического раствора для получения разведения вакцины, соответствующего
по мутности 10 ЕД оптического стандарта мутности, см3;
5 - коэффициент пересчета объема вакцины на 1 см3;
10 - степень разведения;
С - концентрация бруцелл. эквивалентная по мутности 10 ЕД оптического стандарта мутности,
равная 1.7 млрд^см3для бруцелл. выращенных на плотной питательной среде, и 2 млрд/см3
для бруцелл. выращенных на жидкой питательной среде.
7.10.2 Проведение испытания
7.10.2.1 Высев вакцины на питательные среды
Вакцину в разведении 1:10 (10’1) по 7.10.1.1 перемешивают и разводят последовательно деся
тикратно до разведения 10э, используя для каждого разведения отдельную пипетку. Взвесь из двух
последних разведений (Ю-8и 10 3) высевают отдельными пипетками по 0.1 см3на поверхность трип-
тозного агара или СДХА. или другой питательной среды для выращивания бруцелл соответственно в
три и пять чашек Петри и равномерно распределяют по поверхности питательной среды. Посевы
культивируют по 7.9.2 и затем подсчитывают количество выросших колоний.
7.10.2.2 Определение количества живых бруцелл
Количество живых бруцелл в вакцине X, млрд/см3, рассчитывают по формуле
где Ki, К2 - количество колоний, выросших при посеве вакцины разведений ИГ8и 10П;
R-. R2- степени разведения вакцины;
3 и 5 - число чашек Петри, засеваемых вакциной в разведениях 108и 105соответственно.
10 - коэффициент пересчета объема вакцины на 1см3.
К =(Л + В)-5-\0‘С
(
2
)
Х =
(
3
)
П р и м е ч а н и е - Для определения количества доз вакцины во флаконе (ампуле) количество живых
бруцелл в вакцине, рассчитанное по формуле (3). умножают на первоначальный объем вакцины во флаконе (ампу ле)
и делят на количество бруцелл. эквивалентное одной иммунизирующей дозе вакцины. Количество бруцелл в дозе
живой или инактивированной вакцины зависит от штамма, использованного для производства вакцины.
9