ГОСТ 32808—2014
7.5 Определение стабильности
Для определения стабильности эмульсии не менее двух флаконов инактивированной вакцины
выдерживают в термостате в течение 14 сут при температуре 37 °С - 38 °С.
7.6 Определение вакуума в ампулах
Определение наличия вакуума в ампулах проводят по ГОСТ 28083.
7.7 Определение стерильности
Стерильность инактивированной вакцины определяют в соответствии с ГОСТ 28085.
7.8 Определение контаминации посторонней микрофлорой
7.8.1 Проведение испытания
Определение контаминации живой вакцины посторонней микрофлорой проводят в соответст
вии с ГОСТ 28085 со следующим дополнением.
Вакцину в трех флаконах (ампулах) регидратируют по 7.3.1, а затем содержимое каждого
флакона (ампулы) переносят во флакон соответствующей вместимости с предварительно внесенным
разбавителем или дистиллированной водой, или физиологическим раствором в соотношении 1:3.
7.8.2 Оценка результатов
На средах МПА и МПБ должен быть рост только чистой культуры бруцелл. Наличие посторон
ней микрофлоры не допускается. В мазках, окрашенных по Граму. должны быть грамотрицательные
мелкие кокки, короткие или овоидной формы палочки.
7.9 Определение количества бруцелл в S-, Я-или SR-формо
7.9.1 Подготовка к испытанию
7.9.1.1 Для проведения испытания готовят объединенную пробу вакцины из трех флаконов (ам
пул). которую выдерживают в холодильнике при температуре 4 °С - 8 °С в течение 30 мин.
7.9.1.2 Приготовление исходного раствора кристаллического фиолетового (красителя)
Исходный раствор кристаллического фиолетового (разведение 1:200) готовят растворением
0.5 г кристаллического фиолетового в 10 см396 %-ного этилового ректификованного спирта при тща
тельном растирании в ступке. К спиртовому раствору кристаллического фиолетового постепенно до
бавляют 90 см3стерильной дистиллированной воды и переносят во флакон. Готовый раствор тща
тельно перемешивают.
Срок годности исходного раствора красителя при хранении в холодильнике при температуре (6
±
2) °С - не более 6 мес.
7.9.2 Проведение испытания
Пробу вакцины, приготовленную по 7.9.1.1. перемешивают и делают последовательные деся
тикратные разведения от 10 1до 109. используя для каждого разведения отдельную пипетку. Вакцину
из разведения 10 s или 10 J (в зависимости от концентрации бруцелл) высевают отдельными пипет
ками на МППГГА или ПМХА по 0.1 или 0,2 см3соответственно в пять чашек Петри и равномерно рас
пределяют по поверхности питательной среды. Чашки помещают в термостат при температуре 37 *0
- 38 °С. затем через один час их переворачивают агаром вверх и инкубируют в течение четырех
-пяти суток. Выросшие колонии окрашивают раствором кристаллического фиолетового в разведении
1:2000, который готовят из исходного раствора красителя по 7.9.1.2 непосредственно перед опреде
лением. Для окрашивания полученный раствор красителя осторожно с помощью пипетки вносят в
чашки Петри с посевами, через 30 с таким же образом отбирают ого и сливают в дезинфицирующую
жидкость (3 %-ный раствор фенола или 5 %-ный раствор хлорамина). Колонии просматривают под
микроскопом или бинокулярной лупой при 16 - 20-кратном увеличении.
7.9.3 Оценка результатов
Колонии бруцелл в S-форме не окрашиваются раствором кристаллического фиолетового. Ко
лонии круглые, выпуклые, блестящие желтого цвета с тонким синим или фиолетовым ободком.
Колонии бруцелл в SR-форме окрашиваются в синий или фиолетовый цвет неравномерно, ок
рашенные участки чередуются с неокрашенными, ободок - широкий, интенсивно окрашенный.
Колонии бруцелл в R-форме окрашиваются в различные оттенки синего или фиолетового цве
та. иногда с исчерченностью окрашенной поверхности и имеют широкий, интенсивно окрашенный
ободок.
8