ГОСТ ISO/TS 21872-2—2013
В.4.2.2 Приготовление
Растворяют целлобиозу вдистиллированной воде при нагревании. Охлаждают и прибавляют антибиотики,
стерилизуют фильтрацией.
В.4.3 Готовая среда
Прибавляют раствор 2 (100 см3) к раствору 1(900 см3)и перемешивают.
В.4.4 Приготовление чашек с агаром.
Вносят в чашку Петри 15— 20 см3среды. Подсушивают поверхность агара перед использованием.
В.4.5 Контроль среды
Для руководства см. [1]. (2].
Для количественной оценки эффективности роста для каждой партии TCBS агара используют солевой пи
тательный агар (SNA) как сравнительную среду и следующие штаммы:
- V.vulnificus: NCTC 11067 (АТСС 29307);
- V.cholerae: не 01-0139 NCTC 8042 (АТСС 14733);
- Eschenchia coli: АТСС 25922. 8739 или 11775.
Эффективность роста рассчитывают по формуле:
c
(N ,.
c
/N
sn
a
)-100.
где N — количество выросших колоний.
Эффективность роста должна составлять по меньшей мере 50 % для любых видов Vibrio и менее 1 %для
Е. coli. Колонии V. vulnificus: NCTC 11067 должны быть желтыми окруженными окрашенной желтой зоной среды,
вто время как V. cholerae: NCTC 8042 должны быть пурпурными окруженными пурпурными зонами среды.
В.5 Модифицированный целлобиозо-лолимиксин-колистин (тСРС) агар
В.5.1 1000-кратный красящий раствор
В.5.1.1 Состав:
бромтимоловый голубой — 4.0 г;
крезоловый красный — 4.0 г;
этанол. 95% — 100 см3.
В.5.1.2 Приготовление
Растворяют краски в этаноле для получения 4 %-ного (масса к объему) раствора. Прибавляют 1 см3этого
раствора на дм5 тСРС агара до конечной концентрации 40 мг бромтимолового голубого и 40 мг крезолового
красного на дм3.
В.5.2 Раствор 1
В 5.2.1 Состав:
пептон — 10 п
мясной экстракт — 5 г;
натрия хлорид — 20 г;
1000-кратный раствор храсителя — 1см3;
агар — 15 г;
дистиллированная вода — 900 см3.
В.5.2.2 Приготовление
Перемешивают компоненты и устанавливают pH 7.6. Охлаждают приблизительно до 50 °С.
8.5.3 Раствор 2
В.5.3.1Состав
целлобиоза — 10 г;
колистин — 400000 единиц;
полимиксин В — 100000 единиц;
дистиллированная вода — 100
см3 В.5.3.2 Приготовление
Растворяют целлобиозу вдистиллированной воде при нагревании. Охлаждают приблизительно до 50 С.
Добавляют антибиотики и перемешивают.
В.5.4 Готовая среда
В.5.4.1 Состав:
1000-кратный раствор красителя — 1см3;
Раствор 1— 900 см3;
Раствор 2 — 100 см3.
В.5.4.2 Приготовление
Прибавляют раствор 2 к раствору 1и перемешивают.
Прибавляют 1см’ данного раствора на дм3тСРС агара до конечной концентрации 40 мг бромтимолового
голубого и 40 мг крезолового красного на дм3.
В.5.5 Приготовление чашек с агаром
Наливают в чашки Петри по 15 — 20 см3. Перед использованием подсушивают поверхность агара.
13