ГОСТ ISOTTS 21872-2—2013
9.5.2 Отбор колоний для подтверждения и приготовления чистых культур
Для подтверждения пересевают с каждой селективной среды (см. 9.4) пять колоний, которые
считаются типичными для каждого потенциально патогенного вида Vibrio spp. Если на чашке менее
пяти типичных колоний, то пересевают все эти колонии.
П р и м е ч а н и е — Пищевые продукты, особенно морепродукты, могут содержать большое число бак
терий. включая непатогенные Vibrio spp., которые могут расти в процессе культивирования на селективных сре
дах. Пересев малого количества колоний может привести к потере потенциально патогенных видов.
Пересевают отобранные колонии на поверхность чашек с солевым питательным агаром или по
верхность скошенного солевого питательного агара (5.3) для получения изолированных колоний. По
севы (9.4.2) инкубируют при 37 °С в течение (24 ± 3) ч.
Для биохимического подтверждения используют чистые культуры.
9.5.3 Тесты для идентификации
9.5.3.1 Тест на оксидазу
Используя платиново-иридиевую петлю или стеклянный стержень, берут часть чистой культуры
с солевого питательного агара (9.5.2) и проводят по поверхности фильтровальной бумаги, увлажнен
ной реактивом на оксидазу (5.4), или используют коммерческие доступные тесты, следуя инструкциям
производителя. Не следует использовать ни никель-хромовую петлю для отбора, ни металлический
провод. Тест считается положительным, если цвет меняется на розовато-лиловый, фиолетовый или
насыщенный фиолетовый в течение 10 с.
9.5.3.2 Микроскопирование
Каждую чистую культуру, полученную по 9.4.2, тестируют в соответствии с а) и Ь):
a) Готовят мазок для окраски по Граму (см. ISO 7218). После окраски, используя микроскоп, от
мечают морфологию и отношение к окраске по Граму и записывают результаты.
b
) Инокулируют пробирку с щелочной солевой пептонной водой (ASPW) (5.1). Посевы инкубиру
ют при (37 ± 1) °С от 1 ч до 6 ч. Наносят каплю культуры на чистую поверхность предметного стекла,
накрывают покровным стеклом и проверяют подвижность под микроскопом. Отбирают культуры, по
казывающие положительный результат на подвижность.
9.5.3.3 Отбор культур для биохимических тестов
Отбирают для биохимического подтверждения оксидазололожительные, грамотрицательные
культуры, которые показывают положительный результат в тесте на подвижность.
9.5.4 Биохимическое подтверждение
9.5.4.1Используя петлю для посевов, инокулируют среды, указанные в Э.5.4.2 — Э.5.4.8. каждой
культурой, полученной из колоний, отобранных по 9.5.3.3.
9.5 4.2 Тест с солевым TSI агаром (5.5)
Инокулируют укалыванием основание столбика агара и проводят вдоль по скошенной поверхно
сти. Посевы инкубируют при (37 ± 1) °С в течение (24 ± 3) ч.
Результаты интерпретируют следующим образом:
a) Основание агаризованной среды
- желтый: глюкозоположительный (ферментация глюкозы);
- красный или неизменившийся: глюкозоотрицательный (нет ферментации глюкозы):
- черный: образование сероводорода;
- пузыри или трещины: образование газа из глюкозы.
b
) Скошенная поверхность агаризованной среды
- желтый: лактозо и/или сахарозо-положительный (ферментация лактозы и/или сахарозы):
- красный или неизменившийся: лактозо и сахарозо-отрицательный (нет ферментации лактозы
или сахарозы).
Типичные реакции V. vulnificus и V. fluvialis соответствуют кислотной поверхности (желтый) и
кислотному основанию (желтый), без образования сероводорода или газа.
Типичные реакции V. mimicus соотвестеуют щелочной поверхности (красный) (иногда кислотной:
желтый) и кислому основанию (желтый) без образования сероводорода или газа.
9.5.4.3 Выявление орнитин декарбоксилазы
Инокулируют жидкую солевую среду (5.7) чуть ниже поверхности. Добавляют около 1 см1 сте
рильного минерального масла на поверхность среды. Посевы инкубируют при температуре 37 °С в
течение(24 ± 3)ч.
6