ГОСТ Р 55500-2013
слоты до установления pH 1,8 - 2,0. Автолиз проводят при температуре (45 - 50) °С
и постоянном перемешивании в течение 1 ч. По окончании автолиза массу фильт
руют через четыре слоя марли. Автолизат охлаждают до 20 °С.
6.2.4.4 Приготовление раствора испытуемого куриного пепсина
1 см1 автолизата количественно переносят в мерную колбу вместимостью
100 см3 и доводят до метки дистиллированной водой. Полученный раствор кури
ного пепсина тщательно перемешивают.
6.2.5 Проведение определения
Активность куриного пепсина, приготовленного по 6.2.4.4, и контрольного
образца куриного пепсина определяют в двух параллельных пробах.
6.2.5.1 В четыре стакана со стеклянными палочками отмеряют по 50 см3
раствора субстрата, приготовленного по 6.2.3. Стаканы с растворами субстрата
устанавливают в ультратермостат с температурой (35,0 ± 0,5) °С и выдерживают в
течение 15 мин, при этом уровень воды в ультратермостате не должен быть ниже
уровня раствора субстрата СТ-3 в стаканах.
6.2.5.2 В два стакана с раствором субстрата СТ-3, помещенных в ультра
термостат в соответствии с 6.2.5.1, вносят параллельно по 1.0 см’ раствора кон
трольного образца куриного пепсина с интервалом 30 или 60 с. В два других ста
кана вносят параллельно по 1,0 см ’ раствора куриного пепсина, приготовленного
по 6.2.4.4, также с интервалом 30 или 60 с. После внесения каждого раствора
фермента содержимое стаканов тщательно перемешивают стеклянной палочкой в
течение 3-5 с. Секундомер включают непосредственно после внесения раствора
куриного пепсина - по завершению слива из пипетки.
Продолжительность свертывания раствора субстрата фиксируют визуально
при появлении хлопьев, осторожно нанося раствор субстрата на стенки стакана
стеклянной палочкой или шпателем. При появлении хлопьев в стекающем слое
субстрата выключением секундомера фиксируют время их образования с момен
та внесения раствора испытуемого препарата до появления хлопьев.
6.2.6 Обработка результатов
Активность куриного пепсина X, уел. ед., вычисляют по формуле (1)
9