ГОСТ 32437—2013
условиях, как минимум, в течение семи дней и над которыми прежде не ставились эксперименты. В
случае с грызунами введение доз следует начинать как можно раньше, после отлучения от матери и
акклиматизации, желательно до того как животным исполнится восемь недель. Тестируемые живот ные
должны быть описаны по роду. виду, происхождению, полу, массе и возрасту. В начале исследо вания
разница в массе подопытных животных должна быть минимальна и не превышать ± 20 % сред ней массы
всех животных, задействованных в исследовании, отдельно каздого пола. Животные должны быть
случайным образом распределены на контрольную и тестовую группы. После распре деления
заметной разницы в средней массе между группами каждого пола быть не должно. Если же она
имеется, следует по возможности повторить распределение. Каждое животное должно быть по мечено
индивидуальным идентификационным номером, и этот номер следует нанести на перманент ной основе,
с помощью татуировки, вживления микрочипа или другим подходящим способом.
Приблизительно за 24 ч до начала исследования шерстка должна быть удалена (выстрижена
или выбрита) со спинной части тела животного. При стрижке или бритье необходимо быть осторож
ным, чтобы не повредить кожу животного, - это может повлиять на процесс всасываемости. Не
меньше 10 % поверхности тела должны быть очищены для нанесения исследуемого вещества.
4.2 Основное испытание
4.2.1 Количество и пол животных
Следует использовать животных обоих полов и такое их количество, чтобы по окончании ис
следования в каждой группе оставалось достаточное их количество для биологического и статистиче
ского анализов. Как правило, грызунов минимум 20 животных, а негрызунов минимум по 4 животных в
каждой группе каждого пола для каждого уровня дозы. В исследованиях, где задействованы мыши,
может возникнуть необходимость в дополнительных животных в каждой группе для проведения всех
необходимых гематологических анализов. В зависимости от цели исследования можно увеличить
статистическую значимость основных показателей, распределив неравномерно животных по уровням
дозы.
4.2.2 Резерв для промежуточных умерщвлений, вспомогательные группы и индикатор
ные животные
При исследовании можно сделать резерв для промежуточных умерщвлений, например в
шесть месяцев, для получения данных о развитии токсических изменений и данных о механизме воз
действия. если это научно обосновано. Также можно задействовать вспомогательные группы для
от слеживания обратимости любых токсических изменений, вызванных химическими веществами
при исследовании. Как правило, их распределяют на группу с самым высоким уровнем дозы и
контроль ную группу. Если запланировано промежуточное умерщвление, количество животных,
включенных в план исследования, должно быть увеличено на число животных, которых планируется
умертвить до завершения исследования. Этим животным следует провести такое же обследование
(включая массу тела, потребление воды и пищи, гематологические и клинические биохимические
показатели, выяв ление патологий), как и животным в стадии хронической токсичности основного
исследования. Можно также сделать резерв (в группах промежуточного умерщвления) для
измерений, ограниченных осо быми. ключевыми показателями, такими, как нейротоксичность или
иммунотоксичность.
4.2.3 Группы доз и дозировка
Следует использовать, как минимум, три уровня доз и параллельный контроль, за исключени
ем тех случаев, когда проводят исследование с максимально возможной дозой. Чаще всего при вы
боре уровней доз основываются на результатах краткосрочных исследований повторной дозы или
исследованиях по обнаружению диапазона доз. Необходимо принимать во внимание любые сущест
вующие токсикологические и токсикокинетические данные по тестируемому или родственным ему
веществам.
Если нет ограничений по физико-химической природе или биологическому воздействию ис
следуемого вещества, должна быть выбрана самая высокая доза для определения основных орга
нов-мишеней и токсичных эффектов воздействия. Однако следует избегать страданий, тяжелой ток
сичности. болей или смерти. Самый высокий уровень дозы следует выбрать для получения признаков
интоксикации, например, о токсичности свидетельствуют изменения уровня сывороточного фермента
или невозможность набрать массу (примерно 10 %).
Однако в зависимости от целей исследования может быть выбрана верхняя доза ниже, чем
доза, подтверждающая наличие токсичности, например, если доза вызывает побочное действие, ко
торое тем не менее слабо отражается на продолжительности жизни или массе тела.
Разница между уровнями доз должна быть направлена на определение зависимости «доза-
ответ» и установление наивысшего уровня дозы, при которой не наблюдается вредный эффект воз
действия (NOAEL) или других предполагаемых результатов исследования, например BMD
(Benchmark Dose) (Исходной дозы) при самом низком уровне дозы. Условия, которые должны быть
приняты во внимание при установлении нижних доз. включают: предполагаемый наклон кривой зави
симости «доза-ответ», дозы, при которых могут происходить важные изменения в метаболизме или
вид токсического действия, когда предполагается пороговая величина или исходная точка для экст-
3