ГОСТ 10444.11—2013
9.2.6 Предварительный подсчет количества выросших колоний на плотных средах проводят через
48 ч. После термостатирования посевов по 9.2.4 отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150
типичных колоний. Характеристика типичных для молочнокислых микроорганизмов колоний приведена
в приложении А.
9.2.7 Для подтверждения принадлежности типичных колоний к молочнокислым микроорганизмам
отбирают из посевов не менее 5 колоний. Принадлежность каждой отобранной колонии к определен
ным микроорганизмам устанавливают по отношению к окраске по Граму, подвижности, наличию ката
лазы, дополнительно при идентификации бактерий рода Leuconostoc определяют наличие капсул, при
идентификации стрептококков рода Streptococcus отсутствие роста в мясо-пептонном бульоне с 9,6 ед. pH
и в мясопептонном бульоне с 6,5 % NaCI.
9.2.7.1 Для определения отношения микроорганизмов к окраске по Граму из колоний приготавли
вают мазки, окрашивают их по ГОСТ 30425 и микроскопируют. Допускается окраску по Граму заменять
тестом Грегерсена. Для этого на предметном стекле в капле 3 %-ного водного раствора калия
гидрооки си эмульгируют культуру микроорганизмов, взятую из колонии с плотной среды. Если через
несколько секунд взвесь ослизняется и за петлей тянутся слизистые нити, то это указывает на
принадлежность испытуемой культуры к грамотрицательным бактериям. У грамположительных
бактерий слизистых ни тей не образуется.
9.2.7.2 Для изучения подвижности микроорганизмов из колоний приготавливают препараты мето
дом висячей или раздавленной капли и микроскопируют. Результаты микроскопировання оценивают в
соответствии с приложением Б. Подвижность допускается определять посевом в полужидкие среды.
9.2.7.3 Каталазную активность культур определяют по ГОСТ 30425.
Результаты определения каталазной активности оценивают в соответствии с приложением Б.
Разложение перекиси водорода у бактерий рода Pediococcus возможно за счет фермента псевдо
каталазы. Поэтому при определении молочнокислых микроорганизмов или бактерий рода Pediococcus в
случае, если вхарактерных колониях обнаружены грамположительные, неподвижные микроорганизмы,
дающие положительную каталазную реакцию, контролируют отсутствие цитохромов путем постановки
бензидинового теста. Дня этого выросшие на чашках Петри колонии микроорганизмов 24-48-часового
возраста заливают раствором бензидина, приготовленным по 5.10. После того, как раствор пропитает
колонии, прибавляют в чашку приблизительно такой же объем 5 %-ной перекиси водорода. Молочно
кислые микроорганизмы, втом числе рода Pediococcus, не содержат цитохромов. В случае присутствия
цитохромов колонии окрашиваются в голубовато-зеленый или ярко-голубой цвет.
При отсутствии бензидина допускается проводить определение наличия псевлокаталазы на сре
де, приготовленной по 5.6, с низкой концентрацией глюкозы 0,05 %.
Посевы инкубируют по 9.2.4, определение псевдокаталазы проводят также как и каталазы по
ГОСТ 30425.
Культуры, образующие псевдокаталазу, относят к роду Pediococcus.
9.2.7.4 При идентификации бактерий рода Leuconostoc готовят препараты и окрашивают их по
Бури для выявления бактериальных капсул. Для этого на хорошо обезжиренном и обожженном пред
метном стекле смешивают каплю бактериальной культуры с мелким порошком черной туши или суспен
зией нигрозина, приготовленной по 5.9.
С помощью другого стекла со шлифованными краями быстро готовят тонкий мазок, который фикси
руют, несколько раз проводя его через пламя горелки. Мазок докрашивают раствором кристаллического
фиолетового или рабочим раствором карбофуксина, приготовленном по 5.11. Мазок осторожно
промы вают в сосуде с водой, оставляют на воздухе для высыхания и микроскопируют. Не допускается
сушить мазок между листами фильтровальной бумаги. Фон препарата окрашивается тонкой суспензией
черной туши или нигрозина. Тела бактерий окрашиваются монохроматично, капсулы остаются
неокрашенными.
9.2.7.5 При идентификации микроорганизмов рода Streptococcus определяют отсутствие роста на
мясопептонном бульоне с 9,6 ед. pH и на мясопептонном бульоне с содержанием хлористого натрия 6,5
%. Для этого культуры, полученные по 9.2.7, пересевают на среды, приготовленные по 5.7 и 5.8.
Посевы инкубируют при температуре (30 ± 1) °С в течение 3 сут.
10 Обработка результатов
10.1 Результаты анализа продукта оценивают по каждой пробе отдельно.
10.2 Если при изучении культуральных, морфологических и биохимических свойств при опреде
лении:
8