ГОСТ 10444.11—2013
П р и м е ч а н и е - Если ожидается рост большого числа молочнокислых бактерий, можно инокулировать
только те разведения, которые необходимо для подсчета.
9.2.2Заливают в каждую чашку Петри приблизительно 15 см3плотной среды, которая приготовле
на и охлаждена до температуры приблизительно 47 °С на водяной бане (см. 6.4).
Тщательно перемешивают посевной материал со средой идают смеси застыть на горизонтальной
поверхности.
9.2.3. При поверхностном способе посева в каждую из двух чашек Петри с агаром переносят с
помощью стерильной пипетки 0,1 или 0,2 см3 пробы для анализа, если продукт жидкий, или исходную
суспензию в случае испытания продукта другой консистенции. Если необходимо, повторяют процедуру,
используя последующие десятичные разведения.
Если для некоторых продуктов необходимо определить небольшое количество микроорганизмов,
то пределы обнаружения могут быть увеличены в 10 раз в результате исследования 1,0 см3 пробы для
анализа, если исходный продукт жидкий, или 1,0 см3 исходной суспензии для продуктов других конси
стенций. В этом случае распределяют 1 см3 инокулята или на поверхности большой чашки Петри (диа
метром 140 мм) или на поверхности пяти маленьких чашек (диаметром 90 мм). В обоих случаях посевы
проводят в двух повторностях, используя две большие чашки или десять маленьких чашек.
Примечание - Посев на поверхность в сочетании с инкубацией в анаэробных или микроаэробных усло
виях применяют вместо посева заливкой.
Ограничение доступа кислорода осуществляют одним из способов, указанных в ГОСТ 30425-97:
на застывшую плотную питательную среду в чашках Петри наливают второй слой расплавленной
и охлажденной до (45 ± 1) °С плотной среды в объеме приблизительно 5,0 см3и оставляют для затвер
дения;
чашки Петри помещают в газовую среду, состоящую из 95 % N2 и 5 % С02;
чашки Петри помещают в анаэростат. Аппарат закрывают и создают вакуум 86,6-93,3 кПа;
в каждую пробирку с жидкой средой наслаивают стерильный жидкий парафин в количестве, не
обходимым для получения высоты столба равным приблизительно 2 см.
Тщательно и быстро распределяют инокулят по поверхности чашки с агаром, не касаясь сторон
чашки шпателем (см. 6.8). Используют новый стерильный шпатель для каждой чашки. Оставляют чаш ки
с закрытыми крышками на 15 мин при температуре окружающей среды для впитывания инокулята
агаром.
9.2.4 Переворачивают засеянные чашки Петри (донышком вверх) и помещают в инкубатор (см.
6.3).
Посевы инкубируют при температуре (30 ± 1) °С не более 5 сут. Допускается инкубировать посевы
не более 3 сут при температуре (37 ± 1) °С.
Необходимо избегать подсушивания агара во время инкубации, чтобы среда не угнетала рост
микроорганизмов.
9.2.5 При определении количества молочнокислых микроорганизмов по методу НВЧ или при вы
явлении молочнокислых микроорганизмов в определенной анализируемой пробе продукта проводят
посевы в жидкую среду. При определении количества молочнокислых микроорганизмов по методу НВЧ
каждую анализируемую пробу исследуемого продукта и (или) его разведение в трехкратной повтор
ности высевают в пробирки с жидкой средой, высевают не менее трех последовательных анализируе мых
проб исследуемого продукта и (или) его разведения, отличающиеся по количеству продукта в них в 10 раз.
При выявлении молочнокислых микроорганизмов в определенной анализируемой пробе продук
та, эту анализируемую пробу высевают в жидкую среду. Соотношение количества высеваемого продук
та к количеству среды должно быть не менее 1:9.
Если при внесении продукта цвет среды меняется (за счет изменения величины pH), то его вос
станавливают с помощью стерильных растворов щелочи и кислоты.
Посевы на жидких средах инкубируют по 9.2.4, ежедневно просматривают, инкубирование по
севов прекращают при появлении видимых признаков роста. Рост молочнокислых микроорганизмов
на жидкой среде сопровождается изменением цвета среды от фиолетового до желтого, помутнением
среды или образованием осадка, возможно выделение газа.
Из пробирок с признаками роста проводят пересев петлей на плотную среду так, чтобы получить
рост изолированных колоний.
7