ГОСТ 32150—2013
7.6.4 Экстракция липидов
Содержимое колбы переносят в цилиндр вместимостью 100 см3,смывая остатки пробы с колбы в
цилиндр с помощью 10 см3дистиллированной воды. В колбу добавляют 25 см3диэтилового эфира,
встряхивают, промывая стенки колбы, и добавляют в цилиндр. Цилиндр с гидролизованной пробой за
крывают стеклянной пробкой и энергично встряхивают с переворачиванием цилиндра в течение при
мерно 1мин. периодически открывая пробкудля сброса давления. Затем осторожно вынимают пробку и
добавляют в цилиндр 25 см3петролейного эфира, ополаскивая эфиром пробку и внутреннюю поверх
ность шлифа. Цилиндр закрывают пробкой и встряхивают с переворачиванием в течение примерно 30 с.
Цилиндроставляют в покоедо полного разделения на водную ипрозрачную эфирную фазы с четкой гра
ницей между ними. Осторожно вынимают пробку, ополаскивают ее и внутреннюю поверхность шлифа с
помощью примерно 5 см3 петролейного эфира так. чтобы он стекал в цилиндр. Отбирают как можно
больше верхнего эфирного слоя с помощью пипетки вместимостью 20 или 25 см3и переносят через во
ронку с безводным сернокислым натрием в грушевидную колбу вместимостью 100 см3, в которую пред
варительно добавляют несколько кристаллов бутилокситолуола (используют воронкудиаметром 56 мм и
длиной 80 мм. в нижнюю часть носика которой помещают тампон из обезжиренной стекловаты и
насыпают безводный сернокислый натрий слоем высотой примерно 30 мм).
Растворитель из грушевидной колбы отгоняют под вакуумом на ротационном испарителе (перед
сбросомдавления в кран впуска воздуха подают поток азота) и затем продувают потоком азота до полно го
исчезновения запаха растворителя. Экстрагированные липиды хранят в плотно закрытой колбе в хо
лодильнике при температуре (6 i 2) °С не более 24 ч. При необходимости более длительного хранения
колбу с экстрагированным жиром хранят в морозильной камере при температуре не выше минус 12 °С
(срок хранения — не более одной недели).
На всех этапах подготовки пробы и экстракции жира необходимо предохранять пробу от прямого
попадания солнечных и ультрафиолетовых лучей.
7.7 Получение метиловых эфиров жирных кислот (метод внутреннего стандарта)
7.7.1 С помощьюстеклянной палочки отбирают из колбы экстрагированныелипиды (см. 7.6.4). по
мещают их в предварительно взвешенную фторопластовую реакционную камеру автоклава или стек
лянную виалу и взвешивают с записью результата взвешивания в миллиграммах до первого
десятичного знака (масса жира должна быть в пределах 40—50 мг). В реакционную камеру автоклава
или виалу с навеской липидов вносят 1см3 раствора метилового эфира трикозановой кислоты и бутил
окситолуола в толуоле (см. 7.2). Перемешивают для растворения липидов идобавляют смесь, приготов
ленную по 7.1. Реакционную камеру помещают в автоклав и закрывают крышкой (виалу плотно
закрывают завинчивающейся крышкойс фторопластовой прокладкой). Перед закрыванием емкостей их
внутренний объем продувают азотом. Автоклав (виалу) с пробой исмесью по 7.1 помещают в предвари
тельно нагретый до (60 1 1)вС суховоздушный или жидкостной термостат и выдерживают при этой
температуре в течение (80 ± 2) мин. периодически перемешивая содержимое с интервалом примерно 15
мин.
7.7.2 После окончания термостатирования содержимое реакционной камеры или виалы перено
сят в пробирку вместимостью 25 см3[можно использовать пробирку, в которой готовилась реакционная
смесь (см. 7.1)]. В реакционную камеру или виалу вносят 3 см3гексана, закрывают крышкой, энергично
встряхивают и смыв добавляют в пробирку. В пробирку добавляют 7 см3водного раствора хлорида на
трия массовой долей 10 %. закрывают пробкой, энергично встряхивают с переворачиванием в течение
10 с и оставляют до полного разделения фаз. Верхнюю органическую фазу осторожно отбирают с по
мощью пипетки вместимостью 5 см3и пропускают через воронку с силикагелем и сернокислым натрием
(см. 7.3). предварительно промытой 3—4 см3гексана (слой силикагеля в воронкедолжен все время быть
смоченным растворителем), собирая фильтрат в пробирку вместимостью 5 см3. Послестекания раство
ра метиловыхэфиров из воронки в нее добавляют 2 см3гексана и фильтрат собирают в этуже пробирку.
Окончательный объем раствора метиловых эфиров жирных кислот должен быть примерно 5—6 см3.
Срок хранения полученного раствора метиловых эфиров жирных кислот — 48 ч в холодильнике
при температуре (6 ± 2) °С.
7.8 Получение метиловых эфиров жирных кислот (метод внутренней нормализации)
Метиловые эфиры жирных кислот получают по 7.7 со следующим изменением в 7.7.1: в реакцион
ную камеру автоклава или виалу с навеской липидов вместо раствора метилового эфира трикозановой
кислоты и бутилокситолуола в толуоле вносят 1см3 раствора бутилокситолуола в толуоле, приготовлен
ного по 7.3.
8