ГОСТ ISO 10272-1—2013
Принимая во внимание, что Campylobacter spp. весьма чувствительны к замораживанию, испытуе
мые пробы не замораживают и хранят при температуре (3 ± 2) °С. Их анализируют в кратчайшие сроки.
Также принимают меры по предотвращению высыхания проб.
8 Приготовление испытуемой пробы
Испытуемую пробу приготавливают в соответствии с конкретным стандартом на определенный
вид продукции. Если не существует конкретного стандарта, рекомендуется, чтобы заинтересованные
стороны достигли соглашения по данному вопросу.
9 Методы проведения испытаний
(см. приложение А)
9.1 Пробы, исходная суспензия и разведения
Для приготовления исходной суспензии испытуемую пробу (масса или объем) вводят в девяти
кратный объем обогатительной среды — бульон Болтона (5.2), с тем чтобы получить соотношение про-
ба/обогатительная среда 1 :10 (масса/объем или объем/объем). Гомогенизируют.
9.2 Обогащение
Исходную суспензию (9.1) инкубируют ваэробных условиях (6.14) при температуре 37 °Св течение
4—6 ч. затем при температуре 41,5 вС в течение (44 ± 4) ч.
9.3 Изоляция
9.3.1 Культуру, полученную в обогатительной среде (9.2), пересевают петлей (6.11) на повер
хность первой селективной изолирующей среды, агара mCCD (5.3).
Аналогичным образом поступают со второй выбранной селективной изолирующей средой для
Campylobacter.
П р и м е ч а н и е — Предпочтительно выбрать вторую изолирующую среду, основанную на принципах, от
личных от агара mCCD. Примерами изолирующих сред, которые можно использовать, являются агар Skirrow. агар
Karmali и агар Preston (см. библиографию).
9.3.2 Посевы (9.3.1) инкубируют при температуре 41,5 °С в аэробных условиях (6.14).
9.3.3 После инкубации в течение (44 ± 4) ч посевы исследуют с целью выявления типичных и/или
подозрительных колоний Campylobacter.
Типичные колонии на агаре mCCD имеют сероватый цвет, часто с металлическим блеском, они
плоские и влажные и имеют тенденцию к разрастанию. Разрастание колоний менее выражено на более
сухих поверхностях агара. Возможно образование других форм колоний.
9.4 Подтверждение вида Campylobacter
9.4.1 Общие положения
Поскольку рассматриваемые бактерии быстро разрушаются на воздухе, необходимо незамедли
тельно следовать процедурам, описанным в 9.4.2—9.4.6.
9.4.2 Отбор колоний для подтверждения
9.4.2.1 Для подтверждения с каждого слоя каждой селективной среды (9.3.1) отбирают по мень
шей мере одну колонию, рассматриваемую в качестве типичной или подозрительной колонии
Campylobacter, и еще четыре колонии, если первая дала отрицательный результат.
9.4.2.2 Проводят посев каждой из отобранных колоний на слой колумбийского кровяного ага
ра (5.4.1), чтобы дать развиться четко изолированным колониям. Посевы инкубируют в аэробных усло
виях при температуре 41,5 °С в течение 24—48 ч. При исследовании морфологии, подвижности,
аэробного роста при температуре 25 ЭС, аэробного роста при температуре41,5 °С и присутствия
оксида-зы следует использовать чистые культуры.
9.4.3 Исследование морфологии и подвижности
9.4.3.1 Одну колонию со слоя колумбийского кровяного агара (Э.4.2.2) суспендируют в 1см3бульо
на Бруцелла (5.4.2) и исследуют морфологию и подвижность при помощи микроскопа (6.13).
9.4.3.2 Для дальнейшего исследования сохраняют все культуры (Э.4.2.2), в которых обнаружены
изогнутые палочки со спиральной «штопорообразной» подвижностью (9.4.3.1).
9.4.4 Исследование аэробного роста при температуре 25 °С
Используя колонии, изолированные по 9.4.2.2, делают посев петлей (6.11) на поверхностьслоя ко
лумбийского кровяного агара (5.4.1).
4