ГОСТ ISO 10272-1—2013
Приложение В
(обязательное)
Состав и приготовление питательных сред и реактивов
В.1 Бульон Болтона
В.1.1 Базовая среда
В.1.1.1 Состав:
продукт ферментативного переваривания животных тканей — 10.0 г:
гидролизат лактальбумина — 5.0 г;
дрожжевой экстракт — 5.0 г;
натрия хлорид — 5.0 г;
натрия пируват — 0,5 г,
натрия пиросульфит — 0.5 г;
натрия карбонат — 0.6 г;
u-кетоглутаровая кислота — 1.0 г;
гемии (раствор в 0.1 %-ном растворе натрия гидроксида) — 0.01 г.
вода — 1000 см3.
В.1.1.2 Приготовление
Базовые компоненты по В.1.1.1 или готовую сухую среду растворяют в 1000 см3воды при слабом нагреве.
Корректируют pH так. чтобы после стерилизации его значение для готовой среды составляло (7,4 ±0.2) ед. pH
при температуре 25 ‘С.
Среду разливают в колбы вместимостью 100—200 см3. Стерилизуют в автоклаве (6.1) при температуре
121*С в течение 15 мин.
8.1.2 Стерильная лизированная дефибринированная кровь лошади
Используют кровь лошади, лизированную сапонином или замораживанием ипоследующим размораживанием.
В.1.3 Раствор антибиотиков
В.1.3.1 Состав:
цефоперазон — 0.02 г;
ванкомицин — 0.02 г;
триметоприма лактат — 0.02 г;
амфотерицин В — 0.01 г:
этанол/стерильная дистиллированная вода 50/50 (по объему) — 5.0 см.
В.1.3.2 Приготовление
Компоненты растворяют в смеси этанола и стерильной дистиллированной воды а соотношении 50 : 50.
В.1.4 Полная среда
В.1.4.1 Состав:
базовая среда (В.1.1) — 1000 сма:
стерильная лизированная дефибринированная кровь лошади (В.1.2) — 50 см3:
раствор антибиотиков (В.1.3) — 5 см3
В.1.4.2 Приготовление
К базовой среде при температуре от 47 ‘С до 50 ‘С в стерильных условиях добавляют кровь, затем раствор
антибиотиков и перемешивают. Соблюдая стерильность, среду разливают в пробирки или колбы, чтобы пригото
вить объем сред, необходимый для испытания. Если обогатительную среду приготавливают заранее, ее надо хра нить
не более 4 ч при комнатной температуре или в темном месте при температуре (3 ±2)аС не более семи дней.
В.1.5 Эксплуатационное испытание
Эксплуатационные характеристики бульона Болтона необходимо испытывать в соответствии с методами и
критериями, описанными в ИСО 11133-2. Примерами подходящих контрольных штаммов являются Campylobacter
jejuni NCTC 11351 или АТСС* 33291 со следующими критериями: > 10 колоний на модифицированном агаре с
углем, цефоперазоном и дезоксихолатом (mCCD) после инкубации в аэробных условиях при температуре 41.5 ’С в
течение (44 ± 4)ч.
В.2 Модифицированный агар с углем, цефоперазоном и дезоксихолатом (агар mCCD)
В.2.1 Базовая среда
В.2.1.1 Состав:
мясной экстракт — 10.0 г;
продукт ферментативного переваривания животных тканей — 10.0 г;
натрия хлорид — 5,0 г;
древесный уголь — 4,0 г;
продукт ферментативного переваривания казеина — 3.0 г;
• Американская коллекция типовых культур (American Type Culture Collection, АТСС).
8