ГОСТ ISO/TS 15495/IDF/RM 230-2012
b)Для уровней содержания меламина до 0,2 мг/кг и циануровой кислоты до 0.3 мг/кг с тем и
другим внутренними стандартами, добавленными в концентрации 0,1 мг/кг вносят в пробу для
анализа 50 мкл рабочего раствора меченого меламина II (А.4.7.3) и 50 мкл рабочего раствора
меченой циануровой кислоты II (А.4.5.3). Тщательно перемешивают, пока внесенные объемы
полностью не абсорбируются матрицей.
Затем добавляют 5 см3воды (А.4.1) в коническую пробирку, подготовленную либо как в а), либо
как в Ь). Перемешивают, так чтобы в пробе не оставалось сгустков. Добавляют 5 см3ацетонитрила
(А.4.2). Энергично встряхивают в течение не менее 1 мин.
Добавляют 30 см3ацетонитрила (А.4.2) и 10 см3воды (А.4.1). Энергично встряхивают в течение
не менее 5 мин, так чтобы в пробе не оставалось сгустков. В идеале лучше использовать
автоматический шейкер. Центрифугируют полученный раствор при ускорении 4000
д
при комнатной
температуре в течение 10 мин. чтобы получить прозрачную надосадочную жидкость.
Если надосадочная жидкость не будет прозрачной, переносят аликвотное количество жидкости
в другую пробирку и снова центрифугируют при 8500д при комнатной температуре в течение не
менее 10 мин. используя настольную центрифугу.
Переносят от 0,5до1см3 прозрачной надосадочнойжидкостивпробирку для
хроматографического анализа. Продолжают анализ LC-MS/MS (А.9.3).
А. 9.2 Холостой опыт
Чтобы компенсировать, при необходимости, загрязнение меламином и циануровой кислотой в
процессе подготовки пробы, используют холостую пробу, подготовленную без добавления матрицы.
Анализируют холостую пробу наряду с каждой серией обычных проб.
А. 9.3 Анализ LC-MS/MS
А .9.3.1 Условия HPLC (ВЭЖХ)
Подвижная фаза А:раствор ацетата аммония (А.6.3.1);
подвижная фаза В:
вводимый объем:
колонка:
ацетонитрил(А.6.3.2);
5 мкл;
TOSOH TSKgel Amtde-80, диаметр 2,0 мм, длина 250 мм.
внутренний диаметр 5 мкм;
комнатная температура;
0,25 см3/мин;
градиент LC как описано в таблице А.З;
поток HPLC направляется на детектор масс-спектрометра в
течение от 3.0 до 13.5 мин
температура:
скорость потока:
градиент:
отводной клапан:
Т а б л и ц а А . З — Градиент LC. используемый для анализа меламина и циануровой кислоты
Время,А.В.
мин%%
0 10 90
8 10 90
13 65 35
14 90 10
15 90 10
15.5 10 90
25 10 90
В таких условиях время удерживания циануровой кислоты составляет- 6,4 мин. а время
удерживания меламина - 11,5 мин (см. рисунки А.1-А.З).
А. 9.3.2 Параметры MS (масс-спектрометрии)
Параметры MS получают посредством ввода шприцем со скоростью 5 мкл/мин по отдельности
рабочий раствор меламина I (А.4.6.2) и рабочий раствор циануровой кислоты I (А.4.4.2), оба в
концентрации 20 мкг/см3, в поток HPLC со скоростью 0,25см3/мин, используя Т-образный
соединитель. Поток HPLC составляет 50% подвижной фазы А (А.6.3.1) и 50% подвижной фазы В
(А.6.3.2). Таблицы А.4-А.6 дают рабочие условия приборов для анализа меламина и циануровой
кислоты.
9