ГОСТ ISO 10993-5—2011
4.2.3 Условия приготовления экстракта
4.2.3.1 Приготовление экстрактов следует проводить в стерильных, химически инертных закры
тых контейнерах с соблюдением правил асептики в соответствиис IS 010993-12.
4.2.3.2 Рекомендуемыми условиями экстракции являются:
a) не менее 24 ч при (37 i 2)°С;
b
) {72
1
2)ч при (50 i 2) °С:
c) (24 i 2) ч при (70i 2) °С;
d) (1 *0.2)чпри(121 ±2)еС.
Рекомендуемые условия применяют в соответствии с характеристиками изделия и конкретными
условиями использования. Методы экстракции с использованием культуральной среды с сывороткой
могут применяться только при условиях, приведенных в 4.2.3.2. перечисление а).
4.2.3.3 Если экстракт (передконтактом склетками) фильтруют, центрифугируютили обрабатыва
юткаким-либодругим способом, это необходимо внести в окончательныйотчетв соответствии с разде
лом 9. Подбор pH экстракта также заносят в отчет. Манипуляции с экстрактом, например, подбор pH.
могут повлиять на результат.
4.3Приготовление материаладля исследования методом прямого контакта
4.3.1 Материалы различных форм, размеров или физических состояний (например, жидкое или
твердое) в исследованиях на цитотоксичностьизучают без изменений.
Желательно, чтобы хотябы одна из сторон твердогообразца была плоской. Другие формыи физи
ческие состояния требуют внесения изменений в образец.
4.3.2 Следуетучитыватьстерильностьобразца.
4.3.2.1 С исследуемыми материалами стерилизованных изделий обращаются с соблюдением
условий асептики втечение всего процесса исследования.
4.3.2.2 Исследуемые материалы изделий, которыо выпускают нестерильными, но подвергают
стерилизации перед применением, стерилизуют методом, рекомендованным изготовителем, и приме
няютс соблюдением условий асептики в течение всего процесса исследования.
Воздействие методовстерилизации истерилизующихагентовна изделие принимаютво внимание
при выборе процедуры приготовления исследуемого материаладо его использования в тест-системе.
4.3.2.3 Исследуемые материалы изделий, которые могутприменяться нестерильными, использу
ютв таком виде, в каком они выпускаются, процессприготовления экстрактов проводят ссоблюдением
условий асептики втечение всего процесса исследования.
4.3.3 Жидкости исследуют:
a) прямым осаждением: или
b
) осажденном на биологически инертную абсорбирующую матрицу.
П р и м е ч а н и е — Для этой цели подходят фильтровальные диски.
4.3.4 Если необходимо, материалы, являющиеся суперабсорбентами всоответствии с классифи
кацией. погружают в культуральную среду перед исследованием, чтобы избежать сорбции культураль
ной среды в сосуде, используемом для исследования.
5 Линии клеток
5.1 Обычно используютизвестные линии клеток из известных источников1>.
5.2 Если требуется особая чувствительность, используют лишь первичные клеточные культуры,
линии клеток и культурыорганического типа, полученные непосредственноизживых тканей, еслиможно
продемонстрировать воспроизводимость и точностьответной реакции.
5.3 Если маточная культура линии клеток сохраняется, то ее содержат при температуре минус
80 SC или ниже в соответствующей культуральной среде, содержащей вещество, защищающее от воз
действия низких температур (криопротектор), например, диметилсульфоксид или глицерол. Длитель
ное хранение (от нескольких месяцевдо многихлет)возможнотолько при температуре минус 130 °Сили
ниже.
1) Например, рекомендуемыми линиями клеток являются Amencan Type Culture Collection CCL 1 (NCTC
wiom
929). CCL 163 (Balb.-ЗТЗ клон A31), CCL 171 (MRC-5) и CCL 75 (WI-38). CCL 81 (Vero) и CCL 10 ЦВНК-21 (С-13)] и V-79
379A. Эта информация приводится для удобства пользователя настоящим стандартом и не является рекламой
этой продукции со стороны ISO. Возможно использование других линий клеток, если доказано, что они приводят к
таким же или более релевантным результатам.
3