ГОСТ ISO 10993-5—2011
П р и м е ч а н и е — Контроль свежей культуральнойсреды принеобходимости подвергают исследованию.
8.2.8 Сосуды инкубируют, используя условия, описанные в 8.2.3, в течение периода времени,
соответствующего специфическим условиям конкретной пробы.
8.2.9 После периода инкубации, длительностью поменьшей мере 24 ч. определяют эффект цито
токсичности в соответствии с 8.5.
8.3Испытание методом прямого контакта
8.3.1 Это испытание позволяет осуществить качественную иколичественную оценки цитотоксич
ности.
8.3.2 Определенное количество постоянно перемешиваемой клеточной суспензии капают в каж
дый из достаточного числа сосудов для прямого воздействия на исследуемый образец. Клетки равно
мерно распределяют по поверхности каждого сосуда, осторожно вращая сосуд в горизонтальной
плоскости.
8.3.3 Культуру инкубируютпри температуре (37 ±2)еС в воздухе в присутствии 5 % (доля объема)
двуокиси углерода или без него в соответствии с выбраннойдля культуральной среды буферной систе
мой до техпор. пока культуры не вырастутдо субконфлуэнтности.
8.3.4 Перед началом исследования субконфлуэнтность и морфологию культур проверяют с
помощью микроскопа.
8.3.5 Удаляют культуральную среду. Затем в каждый сосуд доливают свежую культуральную
среду.
8.3.6 Осторожнопомещаютисследуемыеобразцы наклеточныйслойвцентрекаждогодублирую
щего сосуда и убеждаются в том. что образец покрывает приблизительно 1/10 поверхности клеточного
слоя.
Проявляют осторожность для предотвращения нежелательного движения образцов, поскольку
оно может привести к физическому повреждению клеток, например ихсмещению.
П р и м е ч а н и е — При необходимости образец перед добавлением клеток помещают в сосуд.
8.3.7 Готовят дублирующие сосуды для отрицательного и положительного контрольных образ
цов.
8.3.8 Сосуды инкубируют вусловиях, описанныхв 8.3.3 в течение необходимого периодавремени
(не менее 24 ч). соответствующегоспецифическим условиям конкретной пробы.
8.3.9 Надосадочкую культуральнуюсредусливаюти определяютцитотоксическийэффект в соот
ветствии с 8.5.
8.4 Испытание методом непрямого контакта
8.4.1 Испытание методом диффузии на агаре
8.4.1.1 Это исследование используют для качественной оценки цитотоксичности. Исследование
непригоднодлявымываемыхвеществ, которыенемогут диффундироватьчерезслойагараили которые
вступают в реакцию сагаром.
8.4.1.2 Для исследования капают определенное количество постоянно перемешиваемой клеточ
ной суспензии в каждый издостаточного числадублирующих сосудов. Клетки равномерно распределя
ютпо поверхности каждогососуда, осторожно вращая сосуды в горизонтальном направлении.
8.4.1.3 Культуры инкубируют при (3712) *С в воздухе с 5 % (доля объема)двуокиси углерода или
безнее всоответствии с выбраннойдля культуральнойсреды буферной системойдо техпор, пока куль
туры не вырастут приблизительнодо конфлуэнтности в концелогарифмической фазы кривой роста.
8.4.1.4 Перед началом исследования субконфлуэнтность и морфологию культур проверяют с
помощью микроскопа.
8.4.1.5 Удаляютиз сосуда культуральную среду. Затем смешиваютсвежую культуральную среду,
содержащую сыворотку с растопленным агаром, чтобы окончательная концентрация агара составляла
от0.5 %до 2 %. и вносят соответствующийобъем в каждыйсосуд. Используютисключительноагар, кото
рый подходит для выращивания клеток млекопитающих в культуре. Смесь культуральной среды с ага
ром должна находиться в жидком состоянии, при температуре, совместимой с температурой клеток
млекопитающих.
П р и м е ч а н и е — Доступен агар сдостаточным диапазоном молекулярной массы и чистоты.
8.4.1.6 Осторожнопомещаютнесколькоисследуемыхобразцов наотвердевшийслойагара в каж
дыйсосуд. Убеждаются, что образец покрывает приблизительно 1/10 поверхности клеточногослоя.
5