ГОСТ 31674-2012
более 12 мес. избегая попадания прямых солнечных лучей и насыщения дрожжей атмосферной
влагой.
4.1.2.6 Культивирование стилонихий и тестирование кормов проводят в отдельном помещении,
изолированном от химических токсичных реактивов (особенно отлетучих соединений, хорошо
растворимых в воде). В стерильную чашку Петри вносят 25 см3 рабочего раствора Лозина-
Лозинского, затем пипеткой переносят в нее массу стилонихий. При этом кончик пипетки,
заполненный культурой стилонихии. нужно предварительно погрузить в чашку Петри с рабочим
раствором Лозина-Лозинского. Туда же в качестве корма для стилонихий на кончике иглы,
продезинфицированной 70 %-ным раствором этилового спирта, вносят 0.003 г высушенных дрожжей
(2-3 крошки диаметром 1-2 мм). Чашку Петри помещают в термостат для культивирования
стилонихий при температуре от 22 °С до 24 °С. Пересев культуры для хранения проводят 2 раза в
неделю.
Допускается культивирование стилонихий вне термостата при температуре от 18 °С до 24 °С. В
этом случае для поддержания постоянной температуры используют лампу дневного света,
установленную на определенном расстоянии от чашек Петри, обеспечивающем заданную
температуру. Лампу вместе с чашками накрывают полиэтиленовой пленкой, создав подобие
теплички, где температура должна быть постоянной. Во избежание попадания прямых солнечных
лучей чашки Петри накрывают бумагой.
Необходимо учитывать, что культура стилонихий не обладает генетической стабильностью.
Приблизительно через год-гюлтора работы с культурой она стареет, теряет однородность,
жизнеспособность, подвижность, неадекватно реагирует на токсиканты. В этом случае необходимо
раз в год подсаживать свежий клон стилонихий к старой культуре или полностью заменять ее на
новую. С целью замедления процесса вырождения культуры стилонихий при пересадке на свежую
среду необходимо отбирать не только из предыдущей чашки Петри суточную культуру, но и из двух
резервных чашек Петри с двух-, трехсуточными культурами, в которых инфузории имеют наибольшую
подвижность и плотность.
4.1.2.7
используют
Подготовку тест-организмов
только суточную культуру
проводят в следующем порядке. Для биотестирования
стилонихий, находящуюся в фазе экспоненциального
(активного) роста. С этой целью за сутки до анализа массу стилонихий пересаживают в новую
питательную среду с кормом и помещают в термостат при оптимальной температуре от 22 °С до 24 °С.
При этом стилонихии активно размножаются и концентрируются вокруг корма.
Не допускается использовать культуру стилонихий. зараженную другими видами простейших,
микроскопическими грибами или бактериями, что может произойти при использовании нестерильной
посуды, плохо подсушенных или просроченных дрожжей.
Для получения достоверных результатов биотестирования необходимо регулярно проверять
состояние стилонихий. их подвижность, а один раз в месяц - реакцию культуры на действие
модельного токсиканта (4.1.2.4), для чего каплю со стилонихиями помещают в лунку предметного
стекла и после подсчета их количества заливают 0.2 см3 раствора модельного токсиканта рабочей
концентрации 0.1 мг/дм3.Через 30 мин подсчитывают количество оставшихся живыми стилонихий.
Результат считают удовлетворительным, если выживают не менее 50 % стилонихий.
4.1.2.8 Подготовку исследуемого корма проводят в следующем порядке. Среднюю пробу
исследуемого корма измельчают и просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.
4.1.2.9 Приготовление водного раствора ацетонового экстракта проводят в следующем порядке.
Пробу исследуемого корма массой (10 ± 0.1) г помещают в пробирку с пришлифованной пробкой
вместимостью 25 см3 или в коническую колбу со шлифом вместимостью 50 или 100 см3 и заливают
определенным количеством ацетона в зависимости от вида исследуемого корма.
Для получения ацетонового экстракта пробирку или колбу энергично встряхивают не менее 2
мин. а затем отстаивают в течение не менее 10 мин и не более 15 мин.
При высокой набухаемости (гигроскопичности) исследуемого корма допускается увеличивать
количество ацетона на 5-10 см3 таким образом, чтобы толщина слоя ацетона над кормом была не
менее 2 мм. Раствор вновь взбалтывают в течение 2 мин. После повторного отстаивания в течение 10
мин осторожно отбирают автоматической пипеткой или шприцем с длинной иглой 0.5
см3полученной надосадочной жидкости экстрактов и переносят ее в химический стакан или колбу с
водным раствором Лозина-Лозинского.
Все параметры приготовления водного раствора ацетонового экстракта в зависимости от вида
исследуемого корма представлены в таблице 1.
5