ГОСТ 31674-2012
флакона, видимые при увеличении от 80 до 150 раз.
Культуру колподы выпускают во флаконах или ампулах. Каждый флакон (ампула) рассчитан на
получение 2 см3 активной культуры с концентрацией не менее 5000 клеток в 1 см3. В качестве
источника питания для колпод используют споры бактерий Bacillus subtilis, прикрепленные к кусочку
целлофана вместе со спорами колпод. К каждым двум упаковкам культуры прилагается флакон
(ампула) с питательной средой.
Срок годности культуры - 1 г от даты выпуска препарата. Препарат хранят при комнатной
температуре в защищенном от света месте.
Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы для биотестирования
на колподах - по 4.1.1.
4.2.2 Подготовка к проведению испытаний
4.2.2.1 Изготовление блока луночных микроаквариумов и порядок обработки посуды - по 4.1.2.1
и 4.1.2.2.
4.2.2.2 Приготовление модельного токсиканта - по 4.1.2.4.
4.2.2.3 Рабочим раствором питательной среды для разбавления ацетонового экстракта
исследуемого корма является раствор Лозина-Лозинского (4.1.2.3).
4.2.2.4 Подготовку тест-организмов проводят в следующем порядке. Для проведения испытаний
не позднее чем за 24 ч до использования вскрывают два флакона с культурой колподы и один флакон
с питательной средой (один набор). В каждый флакон с культурой колподы наливают по 2 см3
питательной среды, затыкают ватно-марлевыми пробками и ставят в термостат при температуре от
26 °С до 28 °С на 24 ч. За это время происходит массовое эксцистирование спор. При этом
полученная культура колподы находится в физиологически активном состоянии, оптимальном для
постановки биотеста в течение 3 сут после эксцистирования.
Непосредственно перед применением необходимо убедиться в активности культуры колподы.
Для этого каплю культуры исследуют под микроскопом (увеличение 2 * 14). Колподы в количестве не
менее 50 клеток в поле зрения должны активно двигаться. Кроме этого необходимо проверять
активность культуры (новой партии) на модельном токсиканте (4.1.2.4). Для этого следует смешать на
предметном стекле каплю культуры с такой же по объему каплей рабочего раствора сульфата меди
(0.1 мг/дм3)- В течение 30 мин должны оставаться живыми и подвижными не менее 50 % колпод.
4.2.2.5 Для подготовки среднюю пробу испытуемого корма измельчают до прохода через сито с
ячейками диаметром 1 мм. Полученный таким образом однородный корм готовят параллельно двумя
способами, экстракцией токсичных соединений из корма ацетоном с последующим разведением
ацетонового
токсических
экстракта водным минеральным раствором Лозина-Лозинского или экстракцией
соединений из корма водным минеральным раствором Лозина-Лозинского для
дополнительного обнаружения водорастворимых токсинов.
Концентрированные компоненты комбикормов и кормовые добавки анализируют по схеме
биотестирования комбикормов, предварительно введя эти вещества в количестве, определенном
рецептом или зоотехническими нормами, в размолотый образец проверенного биотестированием
нетоксичного на 100 % зерна пшеницы.
4.2.2.6 Приготовление водного раствора ацетонового экстракта испытуемого корма - по 4.1.2.9.
4 2.2.7 Приготовление водного экстракта испытуемого корма - по 4.1.2.10.
4.2.3Проведение испытания
Из флакона отбирают 20 мкл питательной среды с колподами и помещают в микроаквариум или
в лунку предметного стекла. Приливают либо 200 мкл водного раствора ацетонового экстракта, либо
200 мкл водного экстракта испытуемого корма.
В контрольных тестах (проводят трехкратно при смене партии свежеприготовленного раствора
Лозина-Лозинского) к 20 мкл раствора с инфузориями приливают 200 мкл минерального раствора
Лозина-Лозинского. а для проверки качества ацетона к 20 мкл раствора с инфузориями приливают
200 мкл 1 %-ного раствора ацетона в минеральном растворе Лозина-Лозинского (0.1 см3ацетона (100
мкл) на 10 см3 раствора Лозина-Лозинского). Время анализа в случае испытания водного раствора
ацетонового экстракта - 1 ч. в случае испытания водного экстракта - 3 ч (для того, чтобы в период
экспозиции растворы в лунках не подсохли, под блок микроаквариумов или предметные стекла
подкладывают смоченную водой фильтровальную бумагу и накрывают их стеклянным колпаком).
По истечении всего времени анализа просматривают весь объем микроаквариума или лунки и
учитывают наличие живых колпод.
Если образец токсичен, то живых колпод не обнаруживают (поле зрения пусто) или находят
единичные малоподвижные клетки.
4.2.4Обработка результатов
Критерием определения токсичности служит время от начала воздействия испытуемого
раствора до гибели большинства (более 90 %) колпод. факт которой констатируют на основании
8