(Продолжение Изменения № 1 к ГОСТ 31674—2012)
на — 0.01 г на 100 см3 среды. После двух-трех пересеваний на среду, содержащую антибиотик, при
условии отсутствия бактериальной зараженности культуру пересевают на рабочую среду.
Признаками бактериального заражения среды с инфузориями может быть наличие в пробирках
осадка в виде хлопьев, повышенной мутности среды или бактериального кольца на верхней границе
среды.
4.3.3.3 Подготовка пробы
Подготовка проб по 4.1.2.8.
Белково-витаминно-минеральные концентраты, премиксы, другие компоненты комбикормов и
кормовые добавки вносят в количестве, соответствующем рецепту комбикорма, в размолотую пробу
зерна пшеницы (ячменя), проверенного биотестированием и нетоксичного на 100 %. Пробу зерна раз
малывают и тестируют вдень проведения анализа и не хранят.
Консервированные корма для животных измельчают до получения однородной массы, анализиру
ют по схеме биотестирования комбикорма, но с учетом содержания в этих кормах влаги, определение
которой осуществляют в соответствии с ГОСТ 9793.
4.3.4 Проведение испытаний
4.3.4.1 Экстрагирование токсичных веществ из проб корма
Навеску анализируемого корма массой около 50 г помещают в мерную колбу вместимостью
250 см3, приливают 100 см3ацетона и экстрагируют на аппарате для встряхивания жидкостей втечение
1 ч. Затем раствор осторожно сливают через бумажный фильтр в колбу или выпарительную чашку. По
вторное экстрагирование проводят 50 см3 ацетона в течение 30 мин. Жидкость сливают через бумаж
ный фильтр, промывают его от 10 до 20 см3ацетона. Экстракты объединяют и выпаривают на водяной
бане при температуре от 50 °С до 60 °С в вытяжном шкафу до полного испарения ацетона.
После выпаривания в чашку вносят от 1 до 2 см3 ацетона, чтобы смыть маслянистый экстракт со
стенок чашки, и приливают 10 см3 пелтонной среды. Перемешивают и выпаривают содержимое до пол
ного удаления запаха растворителя, фильтруют в виалы и. используя pH-метр. доводят до 7—7.5 ед. pH
раствором гидроокиси натрия молярной концентрации 0.1 или 0.01 моль/дм3.
Параллельно готовят контрольный экстракт с целью определения качества ацетона и рабочей
среды. Для этого проводят выпаривание растворителя (без навески анализируемого корма), внесение
среды, доведение значения pH вышеуказанным способом. Полученный контрольный экстракт должен
быть нетоксичным. Качество ацетона проверяют каждый раз при использовании новой партии, а каче
ство питательной среды — при приготовлении новой порции.
4.3.4.2 Проведение биотестирования
Для каждой пробы проводят три параллельных испытания.
В каждую из трех пробирок типа Эппендорф вносят по 0.11 см3 подготовленной по 4.3.3.2 куль
туры инфузорий Tetrahymena pyriformis (тетрахимена пириформис). Отбирают пилеточным дозатором
из каждой пробирки 0,01 см3 культуры, помещают на предметное стекло и подсчитывают количество
инфузорий. Добавляют в каждую пробирку 0,1 см3 экстракта, приготовленного по 4.3.4.1. и оставляют
при комнатной температуре.
Через 60 мин подсчитывают количество живых инфузорий в 0.01 см3 на предметном стекле под
микроскопом, просматривая весь объем капли и все ее слои.
4.3.5 Обработка результатов
Степень токсичности корма определяют по количеству живых и погибших инфузорий через 60 мин
после начала биотестирования.
Для этого рассчитывают коэффициент выживаемости инфузорий К, %. по формуле
К , . ^ 2 " 10°,(2)
где S2 — среднеарифметическое значение (трех испытаний) количества инфузорий в 0.01 см3 среды
культивирования через 60 мин после введения пробы;
S, — среднеарифметическое значение (трех испытаний) количества инфузорий в 0.01 см3 среды
культивирования до введения пробы;
100 — коэффициент перевода в проценты.
На основании вычисленного коэффициента выживаемости оценивают токсичность исследуемого
корма:
- если значение К, не менее 90 %. корм является нетоксичным.
4