ГОСТ 31674-2012
Нетоксичный корм используют по назначению без ограничений. Токсичные корма использованию не
подлежат.
5.2 Определение общей токсичности кормов в опыте на мышах
5.2.1 Основные положения
Метод основан на извлечении токсичных веществ из кормов растительного и животного
происхождения, комбикормов и кормовых добавок ацетоном или водой (в зависимости от результатов
экспресс-биотеста) и введении экстракта однократно в желудок белым мышам.
5.2.2Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы
Шкаф вытяжной со следующими характеристиками: 220В/50Гц/10А.
Весы лабораторные по ГОСТ 24104. среднего класса точности, с пределом допускаемой
абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ± 0.01 г.
Мельница лабораторная, обеспечивающая крупность помола 0.1 мм.
Аппарат для встряхивания жидкостей.
Баня водяная с максимальной температурой нагрева 100 °С. обеспечивающая точность
поддержания температуры ♦ 0.5 вС.
Колбы мерные 2-100(500.1000)-2 по ГОСТ 1770.
Чашка выпарительная 5 по ГОСТ 9147.
Цилиндры 1(3)-250 по ГОСТ 1770.
Шприцы на 1 или 2 см3по ГОСТ 22967 с тупыми изогнутыми иглами.
Сито металлическое с отверстиями диаметром 1 мм.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
Мыши белые живой массой от 16 до 25 г.
Ацетон по ГОСТ 2603, ч.д.а.. ос.ч.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Масло растительное.
5.2.3Подготовка к проведению испытаний
5.2.3.1 Для подготовки пробы для испытаний среднюю пробу испытуемого корма измельчают и
просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.
Концентрированные компоненты комбикормов и кормовые добавки анализируют по схеме
биотестирования комбикормов, предварительно введя эти вещества в количестве, определенном
рецептом или зоотехническими нормами в размолотый образец проверенного биотестированием,
нетоксичного на 100 % зерна пшеницы.
5.2.3.2 Приготовление ацетонового экстракта испытуемого корма проводят в следующем
порядке. В колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 500 см3 помещают 100 г измельченного
корма, наливают от 200 до 300 см3 ацетона и экстрагируют 3 ч на аппарате для встряхивания
жидкостей. Слой экстрагента над пробой должен быть не менее 1 см.
После окончания экстракции жидкость фильтруют через бумажный фильтр (белая лента) и
помещают в чашку для выпаривания. Оставшийся в колбе корм дополнительно промывают
небольшой порцией экстрагента (не менее 20 см3), промывную порцию фильтруют через тот же
фильтр. Экстракт концентрируют в вытяжном шкафу до полного удаления запаха растворителя и
получения маслянистого остатка желтоватого или коричневого оттенка. Для ускорения процесса
чашку для выпаривания с экстрактом помещают на водяную баню с температурой от 45 °С до 50 °С.
Периодически оседающий на стенках чашки осадок смывают на дно чашки, покачивая ее и обмывая
растворителем.
Экстракт, оставшийся на стенках чашки, смывают экстрагентом на дно, затем снова
концентрируют. Добавляют в чашку 2.5 см3 растительного масла (кроме экстракта из жмыхов). При
необходимости экстракт можно хранить в холодильнике не более 3 сут.
5.2.3.3 Для приготовления водного экстракта испытуемого корма пробу массой 50 г помещают в
коническую колбу на 500 см3 и приливают 200 см3 дистиллированной воды. Колбу помещают на
аппарат для встряхивания жидкостей на 20 мин. По окончании экстракции содержимое колбы
фильтруют через бумажный фильтр (белая лента). Полученный водный экстракт испытуемого корма
можно хранить в холодильнике не более 2 сут.
5.2.3.4 Для подготовки тест-организмов в отдельную клетку отсаживают пять белых мышей
весом от 16 до 25 г и выдерживают их без корма в течение 4 - 5 ч.
Все корма для кормления вивариумных животных, используемых в биотестировании, должны
быть непременно проверены на общую токсичность и иметь отрицательные результаты.
5.2.4Проведение испытания
Пяти мышам с помощью шприца с тупой изогнутой иглой длиной от 3 до 4 см вводят однократно
через рот в желудок 0,5 см3 выпаренного остатка ацетонового экстракта корма или 0,5 см’ водного
экстракта корма. Наблюдают за мышами в течение 3 сут. не ограничивая их в кормах и воде. При
11