(Продолжение Изменения № 1 к ГОСТ 31674— 2012)
4.4.3.4 Контроль качества культур инфузорий Paramecium caudatum (парамеции каудатум) и TeU
rahymena pyriformis (тетрахимема пириформис)
Контроль качества культур инфузорий осуществляют с помощью модельного токсиканта 5-водной
сернокислой меди.
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 20 мг 5-водной сернокислой меди, растворяют
в дистиллированной веще и доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой.
Раствор модельного токсиканта с концентрацией 0.02 мг/см3 готовят путем разведения в 10 раз
раствора с концентрацией 0.2 мг/см3.
Контроль качества культур проводят 1 раз в месяц с помощью свежеприготовленного раствора
модельного токсиканта.
Примечание — Конечнаяконцентрациямодельноготоксикантавлункахс инфузориями0.1 и0.01 мг/см3,
т.к. всоответствиис инструкцией проведения биогестированияс помощьюприборатоксикант разбавляется влун
ках в2 раза.
При надлежащей чувствительности культур и правильно поставленном эксперименте выживае
мость инфузорий Paramecium caudatum (парамеции каудатум) в растворе сульфата меди с концентра
цией 0,01 мг/см3 через 2 ч не более 50 %, а относительный прирост культуры Tetrahymena pyriformis в
контрольной пробе с концентрацией сульфата меди 0.1 мг/см3 составляет от 40 % до 60 % от соот
ветствующего показателя в контрольной пробе без токсиканта. Контрольной пробой является среда
культивирования, разбавленная в 20 раз.
4.4.3.5 Проверка качества дистиллированной воды
Перед анализом необходимо проверить качество дистиллированной воды влаборатории.
Для этого влунку планшета прибора вносят дозатором 100 мм3 культуры Paramecium caudatum и
добавляют 400 мм3дистиллированной воды. Через 30 мин проверяют состояние инфузорий. Вода счи
тается доброкачественной, если нет гибели инфузорий. Критерий гибели: инфузории перестают дви
гаться. форма клетки становится более широкой.
4.4.3.6 Подготовка пробы
Подготовка проб по 4.3.3.3.
4.4.4 Проведение испытаний
4.4.4.1 Приготовление водных экстрактов
Навеску подготовленной no 4.4.3.6 пробы массой около 10 г помещают в колбу вместимостью
100 см3 с притертой пробкой, приливают 50 см3 дистиллированной воды и экстрагируют на аппарате
для встряхивания в течение 20 мин. Центрифугируют в течение 15 мин при 3000 об/мин. В чистую
по суду отбирают не менее 15 см3надосадочной жидкости (далее — водный экстракт), которую
использу ют для биотестирования. Полученный водный экстракт используют для биотестирования на
первом и втором этапах.
Примечание — Для консервированных кормов пересчитывают массу навески с учетом содержания
влаги иобъемдистиллированнойводыдляэкстракции. Например, присодержании влаги50 % вносятвэкстракци
онную колбу20 г корма и40 см3дистиллированной воды.
4.4.4.2 Приготовление водных растворов ацетоновых экстрактов
Навеску подготовленной по 4.4.3.6 пробы массой около 10 г помещают в колбу вместимостью
50 см3с притертой пробкой, приливают 15 см3 ацетона и экстрагируют на аппарате для встряхивания в
течение 20 мин. После отстаивания в течение 10 мин отбирают 0.5 см3 водного экстракта и переносят
в стакан с 20 см3 дистиллированной воды, получая водный раствор ацетонового экстракта, который
используют для биотестирования. Полученный водный раствор ацетонового экстракта используют для
биотестирования на первом и втором этапах.
При биотестировании сена, соломы и травяной муки допускается объем ацетона для экстракции
увеличить до 25 см3.
Примечание — Для консервированных кормов пересчитывают массу навески с учетом содержания
влаги иобъемырастворовдля экстракции. Например, для полученияводногораствораацетоновогоэкстракта 20 г
корма экстрагируют в20 см3ацетона и после экстракции разводят 1см3ацетонового экстракта в20 см3дистилли
рованной воды.
Параллельно готовят контрольный водный раствор ацетона с целью определения качества аце тона.
Для этого в стакане смешивают 0,5 см3 ацетона с 20 см3дистиллированной воды. Полученный
7